下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需将该基因通过 （方法）注入到羊的 中，则发育成的羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。这一过程涉及到以下哪些过程（多选） 。

A．DNA自我复制B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

(2)若图2中目的基因D需要同时使用MetⅠ和PstⅠ才能获得，而图1所示的质粒无相应的限制酶酶切位点。所以在该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶酶切位点。试帮助完成构建需要的限制酶酶切位点的思路（选填①-⑤）：

①EcoRⅠ②MetⅠ③PstⅠ④DNA连接酶⑤DNA聚合酶

首先用 处理质粒；然后用 处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用 处理质粒，形成了的限制酶酶切割位点，它可被②识别。

(3)检测筛选是一个重要步骤。图3表示在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种方法与培养方法，以检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有 、 。从筛选结果分析，含目的基因的是 （填编号）菌落中的细菌。

⑷DNA分子中，一条链的两个核苷酸通过 连接。如要检测目的基因是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌解的 ，用相应抗体检测。

下列关于微生物的培养和应用的叙述，错误的是

A.通过消毒不能杀死物体内所有的微生物

B.根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目

C.平板划线法不可用于微生物的计数

D.使用过的培养基及培养物必须经过灭菌后才能丢弃

下面是利用微生物制作果酒、果醋的流程示意图，请据图判断下列说法中正确的是（ ）

A. 制作果酒时，先去除烂子粒和枝梗，再用清水冲洗掉污物

B. 榨汁前，榨汁机和发酵瓶都需要用体积分数为70％的盐酸消毒

C. A过程是酒精发酵，A过程结束后，只需要提高一定的环境温度就能产生果醋

D. 导致发酵产物不同的重要因素是温度、时间、菌种等

1958年，美国科学家斯图尔德用胡萝卜韧皮部细胞培养出完整的胡萝卜植株，该过程不需要

A.用酶解法去掉细胞壁

B.在无菌条件下切取具细胞核的细胞

C.适合的光照和温度

D.在培养基中加入一定量的营养物质和激素

腐乳因口感好、营养丰富等特点，成为人们喜爱的食品之一。下列有关腐乳制备的操作正确的是

A．毛霉菌丝大量繁殖时可形成有害的“硬皮”，不能食用

B．制作腐乳时，容器要进行灭菌，装豆腐时操作要缓慢以防止豆腐碎裂

C．逐层增加盐的用量可以析出豆腐中的水分也可以防止杂菌污染

D．不同颜色的腐乳制备过程有很大不同

要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种在

A.加入氮源和杀菌剂的培养基上

B.不含氮源和杀菌剂的培养基上

C. 加入氮源，不加杀菌剂的培养基上

D.不加入氮源和不加杀菌剂的培养基上

以下关于泡菜制作过程的说法中，错误的是

A.泡菜制作过程产生的亚硝酸盐有可能转化为亚硝胺，亚硝胺具有致癌作用

B.泡菜腌制时间的长短会影响亚硝酸盐含量

C. 新鲜蔬菜中亚硝酸盐的含量低

D.乳酸菌在有氧的环境下大量繁殖并发酵生成乳酸

下列关于微生物培养的叙述，错误的是

A.灭菌和消毒的主要区别在于是否杀死孢子和芽孢

B.耐高温的、需要保持干燥的物品可以采用干热灭菌

C.培养基灭菌结束后应该马上倒平板以防止其凝固

D.用酒精擦拭双手只能消毒，不能起到灭菌作用

用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时

①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种

③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌

A．②④ B．③④ C．①③ D．①②

在微生物的实验室培养实验中，将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是

A. 对比观察培养基有没有被微生物利用

B. 为了下次接种时再使用

C. 让未接种的培养基上也能长出菌落

D. 对比分析培养基上是否生有杂菌