2.半滑舌鳎是一种生活于近海温水性大型底层鱼类,雌性个体生长速度是雄性个体的2-4 倍.科学工作者为了建立半滑舌鳎血淋巴细胞制备染色体技术,并用于半滑舌鳎遗传性别的鉴定,从而为半滑舌鳎雌鱼的筛选和性别控制技术研究奠定基础,进行以下实验探究:
实验一:血淋巴细胞体外培养及预处理
用1mL 一次性注射器吸取1%的肝素钠溶液0.1mL,润湿针管,用75%的酒精棉球消毒鱼背部体表,于侧线鳞处采血.将采集的新鲜血样在超净台里接种于全血培养基,排掉最初的2 滴血,每3.8mL 培养基中加0.2mL 全血,分别置于20℃、24℃、28℃、30℃培养48h、60h、72h、96h,将所有样品分成三批.通过血细胞记数,确定最佳体外培养条件,结果如图所示.

实验二:PHA、ConA 和LPS 三种刺激源的作用比较
分别以脂多糖(LPS)、刀豆素A(ConA)和植物血球凝集素(PHA)为刺激源,通过预实验确定各个刺激源的最佳作用浓度,分别在各自的最佳作用浓度下培养,每隔8h左右轻摇一次.通过染色体制片观察统计获得的分裂相数目,结果如表:
刺激源细胞总数分裂相总数有丝分裂指数(%)
PHA5447490.899
ConA4573110.241
LPS6264570.91
实验三:染色体制片
培养终了后,首先将细胞轻轻吹打,然后将所有的细胞悬液倒入离心管中,1200r/min 常温下离心4min,弃去上清液,仅留1.0mL上清液和细胞沉淀.轻吹打沉淀使其形成细胞悬液,低渗、冰上固定30min,1200r/min 离心4min.重复固定2 次,离心弃去上清液后,加入少许新鲜的固定液,吹打均匀形成细胞悬液,取冰冻玻片以足够的高度滴片,每片滴2~3 滴,烤片后晾干.在10%Giemsa 染色液中室温染色约30min,蒸馏水冲洗,晾干镜检.
分析上述实验及结果,回答问题:
(1)在实验一中,肝素钠的作用是防止血液凝固,将采集的新鲜血样在超净台里接种于全血培养基,排掉最初的2 滴血的目的是防止采集的血淋巴细胞被空气中的杂菌污染.
(2)实验一的结果表明,半滑舌鳎血淋巴细胞体外培养最佳条件是培养温度是24℃、培养时间是72小时.
(3)实验二各组实验除添加的刺激源不同之外,其他条件必须相同且适宜,同时还可以设计一对照实验,对照实验的设计思路为不加任何刺激源,放入与刺激源体积相同的蒸馏水.
(4)实验二的结果表明,三种刺激源中最适合的是脂多糖(LPS).
(5)实验三中,要以足够的高度进行滴片,其目的是借助于重力使血淋巴细胞尽量分散开,10% Giemsa 染色液是细胞凃片染色剂,通过观察细胞中的W染色体鉴定半滑舌鳎的性别.
 0  135087  135095  135101  135105  135111  135113  135117  135123  135125  135131  135137  135141  135143  135147  135153  135155  135161  135165  135167  135171  135173  135177  135179  135181  135182  135183  135185  135186  135187  135189  135191  135195  135197  135201  135203  135207  135213  135215  135221  135225  135227  135231  135237  135243  135245  135251  135255  135257  135263  135267  135273  135281  170175 

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