20.玉米自交系(遗传稳定的育种材料)B具有高产、抗病等优良性状,但难以直接培育成转基因植株,为使其获得抗除草剂性状,需依次进行步骤 I、II试验.
Ⅰ.获得抗除草剂转基因玉米自交系A,技术路线如图.

(1)为防止酶切产物自身环化,构建表达载体需用2种限制酶,选择的原则是A(单选).
①Ti质粒内,每种限制酶只有一个切割位点
②G基因编码蛋白质的序列中,每种限制酶只有一个切割位点
③酶切后,G基因形成的两个黏性末端序列不相同
④酶切后,Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
A.①③B.①④C.②③D.②④
(2)如表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果.据表可知,细胞脱分化时使用的激素是2,4-D,自交系乙的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体.
激素
结果
自交系
2,4-D(2.0mg/L)6-BA(0.5mg/L)IBA(2.0mg/L)
愈伤组织形成率(%)芽的分化率(%)根的诱导率(%)
991390
858087
888312
168583
(3)农杆菌转化愈伤组织时,T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞.筛选转化的愈伤组织,需使用含除草剂的选择培养基.
(4)转化过程中,愈伤组织表面常残留农杆菌,导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长.含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达,其产物能催化无色物质K呈现蓝色.用K分别处理以下愈伤组织,出现蓝色的是BD(多选).
A.无农杆菌附着的未转化愈伤组织
B.无农杆菌附着的转化愈伤组织
C.农杆菌附着的未转化愈伤组织
D.农杆菌附着的转化愈伤组织
(5)组织培养获得的转基因植株(核DNA中仅插入一个G基因)进行自交,在子代含G基因的植株中,纯合子占$\frac{1}{3}$.继续筛选,最终选育出抗除草剂纯合自交系A.
II.通过回交使自交系B获得抗除草剂性状
(6)抗除草剂自交系A(GG)与自交系B杂交产生F1,然后进行多轮回交(如图).自交系B作为亲本多次回交的目的是使后代积累越来越多自交系B的遗传物质/优良性状.

(7)假设子代生活力一致,请计算上图育种过程F1、H1、H2、H3各代中含G基因植株的比例,并在图1中画出对应的折线图.若回交后每代不进行鉴定筛选,直接回交,请在图2中画出相应的折线图.


(8)如表是鉴定含G基因植株的4种方法.请预测同一后代群体中,4种方法检出的含G基因植株的比例,从小到大依次是X4,X3,X2,X1
方法检测对象   检测目标  检出的含G基因植株的比例
PCR扩增基因组DNAG基因  x1
分子杂交总mRNAG基因转录产物x2
抗原-抗体杂交总蛋白质G基因编码的蛋白质x3
喷洒除草剂  幼苗抗除草剂幼苗  x4
对Hn继续筛选,最终选育出高产、抗病、抗除草剂等优良性状的玉米自交系.
 0  128296  128304  128310  128314  128320  128322  128326  128332  128334  128340  128346  128350  128352  128356  128362  128364  128370  128374  128376  128380  128382  128386  128388  128390  128391  128392  128394  128395  128396  128398  128400  128404  128406  128410  128412  128416  128422  128424  128430  128434  128436  128440  128446  128452  128454  128460  128464  128466  128472  128476  128482  128490  170175 

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