15.为获得Bt杀虫蛋白的转基因马铃薯,研究人员把苏云金杆菌中的Bt杀虫蛋白基因导入马铃薯体细胞,从培育出转基因马铃薯新品种.
回答下列问题:
(1)Bt杀虫蛋白基因来自苏云金杆菌.可利用苏云金杆菌细胞内合成的mRNA通过逆转录形成单链DNA片段,从而获得目的基因.在生物体外采用PCR技术扩增目的基因,扩增时需要加入引物,其引物是能与目的基因配对的一段脱氧核苷酸序列.
(2)除了通过上述方法可以获取Bt杀虫蛋白基因外,还可以通过化学合成的方法获取Bt杀虫蛋白基因,其前提条件是通过Bt杀虫蛋白的Bt杀虫蛋白的氨基酸序列推导出mRNA核苷酸序列,再合成该基因的脱氧核苷酸序列,这样合成的目的基因与从cDNA文库获取的目的基因相比,脱氧核苷酸序列可能不相同,原因是密码子具有简并性(一个氨基酸可对应多种密码子).
(3)构建基因表达载体时,通常用同种限制性核苷酸内切酶分别切割含目的基因的DNA片段和质粒,原因是使目的基因的DNA片段和质粒具有相同的黏性末端,便于构建(连接)成基因表达载体.用农杆菌转化法将基因表达载体导入植物细胞,此过程利用了Ti质粒具有T-DNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上特点.
(4)从个体生物学水平鉴定转基因马铃薯的培育是否成功,需要对转基因马铃薯进行抗虫的接种实验.
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