12.现有甲、乙两种可能有一定致畸、致癌作用的化学物质,利用动物细胞培养的方法能够鉴定它们是否有毒性,并比较二者毒性的强弱:请完成下列实验报告.
I.实验材料:小白鼠胚胎.
Ⅱ.药品用具:胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片.
Ⅲ.实验原理:将有毒物质加入细胞培养液后,培养的动物细胞会发生染色体数量和结构变异(答出有毒物质使细胞发生变异),根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数(以下称Q值),可判断该化学物质的毒性.
Ⅳ.实验步骤:
(1)制备细胞悬液:把小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎,转入锥形瓶中,加人胰蛋白酶液处理,使胚胎组织离散成单个细胞,再加入动物细胞培养液,制成细胞悬液.
(2)进行细胞培养:
①取A、B、C三个洁净的培养瓶,分别加入等量的细胞悬液.
②向A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙,并将培养瓶摇匀;C瓶不作处理,作为对照.
③把3个培养瓶放在37℃(或适宜温度)的细胞培养箱中培养.
(3)制作临时装片:
①当细胞繁殖到大约第8代左右时,同时从细胞培养箱中取出三个培养瓶,用胰蛋白酶液处理,使培养的细胞从瓶壁上脱落,再加入动物细胞固定液迅速杀死细胞,将细胞固定在不同的分裂时期.
②静置一段时间后,分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬液.滴在与培养瓶有相同编号的载玻片中央,加1-2滴一定浓度的龙胆紫溶液染色,3-5min后,盖上盖玻片,制成临时装片.
(4)镜检和统计:把临时装片放在显微镜下,寻找处于有丝分裂中期的细胞,并与小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片对比以确认发生上述变异的细胞,同时统计该期变异的细胞占细胞总数的百分数(Q值).
V.实验结果:
培养瓶ABC
Q值1.3%12.5%0.1%
Ⅵ.实验结论:甲、乙两种化学物质均有一定毒性,且乙的毒性比甲的毒性大.
10.剪秋罗是一种观赏价值和药用价值都很高的花卉植物,为大量繁殖该植物,某校研究性学习小组对剪秋罗的组织培养进行了相关的探究.
(1)植物组织培养常用MS培养基,该培养基中的蔗糖能为离体组织细胞提供碳源和能源,同时能够维持细胞的渗透压.与微生物培养基的营养成分相比,诱导愈伤组织的培养除了添加的糖类不同外,还应该添加植物激素、提供大量的无机盐
(2)无菌技术是植物组织培养的关键,一般使用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌;外植体消毒一般采用70%的酒精和0.1%的氯化汞溶液处理,但处理既要考虑药剂的消毒效果,又要考虑植物的耐受能力,若要探究对外植体消毒的最佳处理时间,实验的因变量应该是外植体的污染率和存活率(或死亡率).
(3)研究小组若要利用三种不同浓度的6-BA(细胞分裂素类似物)溶液、三种不同浓度的NAA(生长素类似物)溶液来研究两者用量的比例对诱导丛芽的影响,理论上应设计9组实验.为了继续诱导生根,研究小组对诱导丛芽的最佳激素用量比例作了调整,他们提高了6-BA的浓度而不改变NAA的浓度,然后将重新配制的两种植物生长调节剂溶液直接加入诱导丛芽的培养基中继续培养,但指导老师告诉他们诱导生根的措施有明显错误,请你帮助他们改正:应提高NAA的浓度,重新配制培养基转瓶培养.
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