9.降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等.人的降钙素活性很低,半衰期较短.某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素,从预期新型降钙素的功能出发,推测相应的脱氧核苷酸序列,并人工合成了两条72个碱基的DNA单链,两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段,再利用Klenow酶补平,获得双链DNA,过程如图.
在此过程中发现,合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象.分析回答下列问题:
(1)Klenow酶是一种DNA聚合酶,合成的双链DNA有126个碱基对.
(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点-G↓AATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-G↓GATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中,筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证.
①大肠杆菌是理想的受体细胞,这是因为它繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少,将目的基因导入此种受体细胞,需将其处理成感受态(状态).
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是保证目的基因和载体的定向连接(或防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接)
③要进行重组质粒的鉴定和选择,需要大肠杆菌质粒中含标记基因.
(3)经DNA测序表明,最初获得的多个重组质粒,均未发现完全正确的基因序列,最可能的原因是合成的核苷酸单链仍较长,产生缺失碱基的现象.
(4)上述制备该新型降钙素,运用的现代生物工程技术是蛋白质工程.
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