7.研究表明,HER2/neu是一种原癌基因,它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达.抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长,目前已成为有效的生物治疗手段.
(1)选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点,是因为H蛋白在成年个体的正常组织中低表达(填“低表达”或“高表达”).H蛋白是一个跨膜蛋白,结构如图所示.制备免疫小鼠用的H蛋白(抗原)时,应构建胞外区基因,转入原核细胞表达并提纯.
(2)将H蛋白注射到小鼠体内,取该小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,使用的化学诱导剂是PEG(或聚乙二醇),细胞融合的原理是细胞膜的流动性.
(3)将融合细胞在选择培养基中培养,一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长.将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养,吸取有克隆生长的细胞培养液中的上清液(填“上清液”或“沉淀细胞”),应用抗原-抗体杂交技术进行抗体阳性检测.经多次筛选,就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞.
(4)将筛选得到的杂交瘤细胞,经过体外(培养)或小鼠腹腔内培养,获取大量的单克隆抗体.
(5)治疗乳腺癌时,可单独使用抗H蛋白单克隆抗体,也可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”,杀死癌细胞.这充分体现了单克隆抗体特异性强(或识别抗原部位专一)的特点.
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