马里奥?卡佩基等科学家在胚胎干细胞和哺乳动物DNA重组方面的研究中取得一系列突破性发现,这些发现导致了“基因敲除”技术(通常叫基因打靶)的出现,利用这一技术可以准确地“敲除”DNA分子上的特定基因,该技术的过程大致如下:
第一步:分离胚胎干细胞.从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞,在培养基中扩增.这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”.
第二步:突变DNA的体外构建.利用基因工程技术在含靶基因的DNA片段上插入neoR基因(新霉素抗性基因),使该片段上的靶基因失活.
第三步:突变DNA与靶基因互换.将体外构建的突变DNA转移入胚胎干细胞,再通过同源互换,用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个,完成对胚胎干细胞的基因改造.
第四步:将第三步处理后的胚胎干细胞,转移到特定培养基中筛选培养.
其基本原理如图所示:

请根据上述资料,回答下列问题:
(1)第一步从小鼠囊胚的
 
部位,获得胚胎干细胞.
(2)第二步若将靶基因只用一种限制酶敲除,则该DNA片断中应用
 
个酶切位点,再用DNA连接酶将敲除后的若干DNA片断进行连接,得到的重组DNA有
 
种类型.若用一种限制酶将靶基因敲除后,再插入neoR基因,则体外构建的突变DNA有
 
种类型.
(3)第四步的特定培养基中必须加入物质
 
,该培养基为
 
培养基.
(4)研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞,若将该细胞培育成基因敲除小鼠,运用到的生物技术有
 
 

(5)科学家可以通过敲除基因来研究基因的功能,第(4)题中获得的基因敲除小鼠,能否直接用来研究基因的功能?
 
;为什么?
 
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