请回答下列有关温度与酶活性的问题:
(1)温度对唾液淀粉酶活性影响的实验:
将盛有2mL唾液淀粉酶溶液的试管和盛有2mL可溶性淀粉溶液的试管编为一组,共四组.在0℃、20℃、37℃和100℃水浴中各放入一组,维持各自的温度5min.然后,将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中,摇匀后继续放回原来的温度下保温.把
 
的时间作为本实验的起始时间记录下来.再每隔一分钟,取一滴混合液滴在盛有碘液的点滴板上进行观察,记录每种混合液蓝色消失的时间.通过比较混合液中
 
消失所需时间的长短来推知酶的活性.预计
 
温度下混合液因其中的酶失去活性蓝色不会消失.
(2)温度对酶活性的影响主要体现在两个方面.其一,随温度的升高会使
 
接触的机会增多,反应速率变快.其二,因为大多数酶是蛋白质,本身随温度升高而发生改变,温度升到一定程度,酶将完全失活.这两种作用叠加在一起,使酶促反应在某一温度下最快,这一温度就是该酶的
 

(3)科研人员通过蛋白质工程来设计改变酶的构象.在研究溶菌酶的过程中,得到了多种突变酶,测得酶50%发生变性时的温度(Tm),部分结果见表:
半胱氨酸(Cys)的位置和数目 二硫键数目 Tm/℃
野生型T4溶菌酶 Cys51,Cys97 41.9
突变酶C Cys21,Cys143 1 52.9
突变酶F Cys3,Cys9,Cys21,Cys142,Cys164 3 65.5
(注:Cys上角的数字表示半胱氨酸在肽链的位置)
溶菌酶热稳定性的提高,是通过改变
 
和增加
 
得以实现的.从热稳定性高的酶的氨基酸序列出发,利用
 
方法获得目的基因,通过基因工程的手段,可以生产自然界中不存在的蛋白质.
黄曲霉毒素B1(AFB1)存在于被黄曲霉菌污染的饲料中,它可以通过食物链进入动物体内并蓄积,引起瘤变.某些微生物能表达AFB1解毒酶.将该酶添加在饲料中可以降解AFB1,清除其毒性.
(1)AFB1属于
 
类致癌因子,使细胞内的
 
发生突变,导致正常细胞癌变.
(2)图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图据图回答问题:
①在甲、乙条件下培养含AFB1解毒酶基因的菌株.经测定.甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶:乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶.过程l应选择
 
菌液的细胞提取总RNA,理由是
 

②检测酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶,应采用
 
方法.
(3)选取不含AFB1的饲料和某种实验动物为材料,探究该AFB1解毒酶在饲料中的解毒效果.实验设计及测定结果见下表:
组别 添加 肝脏AFB1残留量(ng/g)
AFB1(ug/kg饲料) AFB1解毒酶(g/kg饲料)
A 0 0 6.4
B 100 0 20.9
C 100 1 16.8
D 100 3 11.7
E 100 5 7.3
F 100 7 7.3
据表回答问题:
①本实验中.反映AFB1解毒酶的解毒效果的对照组是
 
组.
②经测定,某污染饲料中AFB1含量为100μg/kg,则每千克饲料应添加
 
克AFB1解毒酶.解毒效果最好.同时节的了成本.
(4)采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是:从提高酶的活性出发,设计预期的蛋白质结构,推测应有的氨基酸序列,找到相对应的
 
下面是探究pH对粉酶活性影响的实验:
【实验原理】将浸在不同pH淀粉酶溶液中的圆滤纸片放在淀粉琼脂培养基上,圆纸片上的酶会催化它周围的淀粉分解,放置30min后将碘液倒在培养基上,如果pH合适,圆纸块四周便会出现一圈不产生蓝黑色的范围(清晰区),表示该处的淀粉已被完全分解为麦芽糖.酶活性越高,被分解的淀粉便越多,而所观察到的清晰区就越大,越清晰.本实验用的淀粉酶从绿豆中提取.
【实验步骤】
(一)将10颗豆浸在水中约2d后,置于研钵中除去种皮,加入2mL蒸馏水将绿豆研成匀浆,过滤后获得 ①提取液;
(二)取1块点样瓷板,选取其中6个凹穴分别编号为C1~C6,按下表所列,向相应编号的凹穴中滴加相应溶液(见图1);
编号 所加溶液 状况
C1 蒸馏水
C2 稀盐酸 无酶的酸性介质
C3 稀碳酸钠溶液 无酶的碱性介质
C4 淀粉酶提取液 酶处于中性介质
C5 酶提取液十稀盐酸 酶处于酸性介质
C6 酶处于碱性介质
 
(三)用打孔器打出6块滤纸小圆片,分别编号为C1~C6,将滤纸浸在相应凹穴的溶液中,用镊子将浸润的小圆片放在淀粉琼脂培养基上,37℃放置30min(见图2);
(四)将碘液倒入培养皿内,旋转约l min后,用自来水缓缓地冲去淀粉琼脂培养基上多余的碘液;
(五)观察培养基表面并度量和比较各清晰区的直径,记录各区的清晰度.
【实验结果】C1观察不到清晰区;C2、C3观察 ④;含纯酶提取液C4和处于酸性介质的酶提取液C5观察到所产生的清晰区的直径小;含处于碱性介质的酶提取液的滤纸片C6观察到清晰区直径最大.
请完成实验设计,并回答相关问题:
(1)补全实验步骤:①
 
;②
 
;③
 

(2)补全实验结果:④
 

(3)本实验中设置的对照组是:
 
(填编号),目的是
 

(4)分析实验结果,结论是
 

 0  110038  110046  110052  110056  110062  110064  110068  110074  110076  110082  110088  110092  110094  110098  110104  110106  110112  110116  110118  110122  110124  110128  110130  110132  110133  110134  110136  110137  110138  110140  110142  110146  110148  110152  110154  110158  110164  110166  110172  110176  110178  110182  110188  110194  110196  110202  110206  110208  110214  110218  110224  110232  170175 

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