2009年10月,我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书.图甲表示该抗虫水稻主要培育流程,据图回答:

(1)④过程应用的主要生物技术是
 

(2)杀虫基因(crylA)是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构,设计并人工合成的,这属于
 
工程技术范畴.
(3)组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造.下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图(示部分基因及部分限制性内切酶作用位点),据图乙分析:
①人工改造时,要使抗虫基因表达,还应插入
 

②人工改造时用限制酶Ⅱ处理,其目的是:第一,去除质粒上的
 
(基因),保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长;第二,使质粒带有单一限制酶作用位点,有利于
 
.第三,使质粒大小合适,可以提高转化效率等.
③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子,并构成重组Ti质粒.分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞,观察到的细胞生长的现象是
 
.科学家预言,此种“转基因抗虫水稻”独立种植若干代以后,将出现不抗虫的植株,此现象来源于
 

(4)由于重组质粒成功导入受体细胞的频率
 
.所以在转化后通常需要进行
 
操作.
(5)为扩大可耕地面积,增加粮食产量,科学家应用耐盐基因继续改良上述抗虫水稻.
①获得耐盐基因后,构建重组DNA分子所用的限制性核酸内切酶作用于图丙中的
 
处,DNA连接酶作用于
 
处.(填“a”或“b”)
②将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法、
 
法和
 
法.
③为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功,既要用放射性同位素标记的
 
作探针进行分子杂交检测,又要用
 
方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性.
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