基因工程
图中甲是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线,表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点.    
 
表一
限制酶BamllⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ
识别序列及切割位点
(1)若对图乙中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性如何变化,为什么?
 

(2)图中将人乳铁蛋白基因插入质粒,可以只用EcoR I同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因,也可以使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因,后一个方法的优点在于可以防止
 

(3)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入
 
酶.重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了
 

(4)图甲过程①可采用的操作方法是
 

(5)从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是
 

(6)该雌性转基因牛经与普通雄性个体交配所产的雌性后代是否也能分泌含人乳铁蛋白的乳汁?
 
为什么?
 

为了解基因结构,通常选取一特定长度的线性DNA分子,先用一种限制酶切割,通过电泳技术将单酶水解片段分离,计算相对大小;然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解,分析片断大小.下表是相关实验.
表二
已知一线性DNA序列共有5000bp(bp为碱基对)第一步水解产物(单位bp)第二步水解产物(单位bp)
A酶切割2100将第一步水解产物分离后,分别用B酶切割1900  200
1400800  600
10001000
500500
B酶切割2500将第一步水解产物分离后,分别用A酶切割1900  600
1300800  500
12001000  200
经A酶和B酶同时切割1900  1000  800  600  500  200
(7)设计主要体现了
 
原则.
(8)由实验可知,在这段已知序列上,A酶与B酶的识别序列分别为
 
个和
 
个.
(9)据表中数据,请在丙图中标出相应限制酶的酶切位点并注明相关片断的大小.
基因工程是现代生物技术的核心.请阅读下文,分析回答下列问题
正常细胞中含有抑癌的P53基因,能表达抗病毒蛋白,帮助修复轻度变异的基因,也能使重复变异的细胞发生凋亡而避免肿瘤的发生;若它失活而不能表达,则基因突变的细胞易形成肿瘤.基因治疗肿瘤是根本的方法,腺病毒以其嗜好增殖细胞和对人体基本无害而成为良好的基因载体.野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因,以及病毒复制基因E1,因此需要重新构建有疗效的、安全的腺病毒.图甲、乙中箭头所指为相应限制酶切点.

(1)DNA解旋酶直接作用于脱氧核苷酸之间的
 
键(化学键);DNA限制酶直接作用于脱氧核苷酸之间的
 
键(化学键).
(2)构建重组腺病毒时,限制酶最好选择,理由是:
 
.既可以去除
 
基因以防止病毒复制后损伤健康细胞,同时还能破坏
 
基因以防止其
 

(3)将目的基因与腺病毒重组时,重组的成功率较低,依然还有大量非重组的野生型病毒的DNA,这是因为
 

(4)要获得更多重组病毒,采用的方法是:获取人体某肿瘤细胞→将E1基因导入肿瘤细胞的基因组中→重组病毒侵染含E1基因的肿瘤细胞→体外培养侵染的细胞.该过程中利用肿瘤细胞能不断复制的特点可以为病毒提供更多的生活场所,那么选用含E1基因的肿瘤细胞进行重组病毒侵染的理由是
 
.筛选重组病毒,可采用离心分层纯化法,其依据是
 

(5)某DNA分子片段含有1000个碱基对.经扩增后,分别只用限制酶EcoRⅠ与同时用EcoRⅠ和HalⅢ两种方法切割,其电泳结果如图丙所示,可推断限制酶HalⅢ在该DNA片段上的切点有
 
个.
(6)如果需将目的基因利用PCR技术扩增10次,则需要在缓冲液中至少加入
 
个引物.
A.210          B. 210+2       C.211       D.211-2.
 0  100614  100622  100628  100632  100638  100640  100644  100650  100652  100658  100664  100668  100670  100674  100680  100682  100688  100692  100694  100698  100700  100704  100706  100708  100709  100710  100712  100713  100714  100716  100718  100722  100724  100728  100730  100734  100740  100742  100748  100752  100754  100758  100764  100770  100772  100778  100782  100784  100790  100794  100800  100808  170175 

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