Question

3．某研究性学习小组同学为了调查北江河中细菌的污染情况进行了实验．实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数．请回答与此实验相关的问题．
（1）实验中制备的牛肉膏蛋白胨培养基的部分成分列表如下：

成分	牛肉膏	蛋白胨	NaCl	蒸馏水
含量	0.5g	1g	0.5g	100ml

表中各成分含量的比例确定的原则是根据所培养微生物对各营养成分的需求量（比例）．
（2）对培养基进行灭菌，通常采用的方法是高压蒸汽灭菌．为了使培养基达到良好的灭菌效果，一般在压力为l00kPa，温度为121℃℃的条件下，维持15～30min．
（3）为了更好的对细菌计数，一般采用的接种方法是稀释涂布平板法，该方法的操作是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后再分别涂布到琼脂固体培养基的表面．
（4）接种后放在恒温箱培养一段时间后，为保证结果准确，选择菌落数在30～300的平板进行计数．该组同学在菌落计数时发现，统计的菌落比实际数目要低，可能的原因是某些菌落可能是由两个或多个细菌连在一起形成．

Answer 1

分析 1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用．
2、实验室的灭菌方法一般有灼烧灭菌（适合于接种工具的灭菌）、干热灭菌（适合于耐高温的、需要保持干燥的物品的灭菌）、高压蒸汽灭菌（适合于培养基等物体的灭菌）．

解答 解：（1）培养基配置的过程中，成分含量的比例确定的原则是根据所培养微生物对各营养成分的需求量（比例）．
（2）对培养基进行灭菌，通常采用的方法是高压蒸汽灭菌．即将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min．
（3）为了更好的对细菌计数，一般采用的接种方法是稀释涂布平板法，该方法的操作是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后再分别涂布到琼脂固体培养基的表面．
（4）接种后放在恒温箱培养一段时间后，为保证结果准确，选择菌落数在30～300的平板进行计数．由于某些菌落可能是由两个或多个细菌连在一起形成，因此统计的菌落比实际数目要低．
故答案为：
（1）根据所培养微生物对各营养成分的需求量（比例）    
（2）高压蒸汽灭菌（答蒸气不得分）    121℃
（3）稀释涂布平板法    梯度稀释    涂布
（4）30～300    某些菌落可能是由两个或多个细菌连在一起形成

点评 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生能够识记培养基的成分以及配置的原则，掌握灭菌的方法，识记稀释涂布平板法的相关操作步骤．