Question

（14分）胰岛B细胞移植是一种有效治疗糖尿病的方法。利用小鼠再生胰腺提取物（RPE)可定向诱导人羊膜间充质干细胞（hAMSCs)分化成胰岛B细胞。请回答下列问题：

（1)取人羊膜组织刮除血块、上皮细胞，冲洗后剪碎，然后用 酶处理，最终制成hAMSCs悬液。将细胞悬液放人培养瓶中进行原代培养，当细胞贴壁生长到一定阶段时，出现 现象，此时细胞停止分裂增殖，这时需要将细胞进行相关处理，然后进行传代培养。

（2）取传至第3代的hAMSCs放入细胞培养板，同时加入RPE进行诱导分化培养。该代hAMSCs能保持细正常的 。诱导分化培养15天后，提取细胞的 ，用胰岛素基因探针进行分子杂交，可初步检测hAMSCs是否分化成胰岛B细胞。

（3）用人的杂交瘤细胞来生产人源单克隆抗体难以成功，因此单克隆抗体大都来自鼠源。但鼠源单抗在人体内使用时，会产生较强的免疫原性，为解决这一问题，发明了嵌合抗体。大致过程如下图所示：

嵌合抗体能降低鼠源抗体的免疫原性，从上图中可以推测，免疫原性的产生主要与抗体的 （选填“v区 "、“c区 "）有关。嵌合抗体的生产属于 工程范畴。

（4）科学家们用细胞融合实验证明，分化的细胞中存在“闲置不用 " 的结构基因。他们把大鼠肝肿瘤细胞和小鼠成纤维细胞融合成杂交瘤细胞，筛选出含有两套肝细胞染色体和一套成纤维细胞染色体的细胞。这些细胞既保持了合成大鼠肝细胞 3种特异蛋白的能力，也合成了小鼠肝细胞这3种蛋白，但是在正常的小鼠成纤维细胞中从不合成这些。由此可见，融合实验证明了小鼠成纤维细胞 。

Answer 1

（1）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 接触抑制 （2）（二倍体）核型 RNA（或mRNA）

（3）C区 蛋白质（4）含有不表达的但肝细胞专一表达的基因，在特定条件下这些“闲置基因”也可表达

【解析】

试题分析：（1）动物细胞培养前，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织获取细胞悬液；当细胞贴壁生长出现接触抑制现象时，细胞停止分裂增殖。

（2）动物细胞培养时，10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型。提取细胞的mRNA，用胰岛素基因探针进行分子杂交，可初步检测hAMSCs基因是否表达，即是否分化成胰岛B细胞。

（3）从上图可以看出，免疫原性的产生主要与抗体的C区有关。嵌合抗体的生产属于蛋白质工程。

（4）由题意可知，含有两套肝细胞染色体和一套成纤维细胞染色体的细胞，既保持了合成大鼠肝细胞 3种特异蛋白的能力，也合成了小鼠肝细胞这3种蛋白，但是在正常的小鼠成纤维细胞中从不合成这些。由此可见，小鼠成纤维细胞含有不表达的但在肝细胞中可专一表达的基因，在特定条件下这些“闲置基因”也可表达。

考点：本题考查动物细胞培养、嵌合抗体、细胞融合等知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理判断或得出正确结论的能力。