Question

6．我省的黑龙港地区土地盐碱化严重，耐盐碱植物的开发一直备受关注．科学家用转基因技术将耐盐基因倒入玫瑰，培育出了耐盐四季玫瑰．据图回答下列问题：

（1）若要获得耐盐基因可以利用从基因文库获取、人工合成法、PCR等技术或来源．
（2）获得的耐盐基因与质粒构建成重组分子，最终构建好的该环状分子称为表达载体（或重组DNA、重组质粒），目的基因能在不同生物体内正常表达原来的蛋白质，说明整个生物界共用一套密码子．
（3）限制性核酸内切酶作用于图中的a处，DNA链接酶作用于图中的a处，其对应的化学键名称为磷酸二酯键．
（4）质粒作为载体，具有的标记基因的作用为鉴别并筛选含有目的基因的受体细胞，启动子的作用为RNA聚合酶识别和结合部位，驱动转录出mRNA．耐盐基因导入受体细胞最常用的方法是农杆菌转化法，还需用到植物细胞工程中的植物组织培养技术，来最终获得转基因植物．
（5）在进行检测时可以用放射性同位素标记的耐盐基因做探针进行分子水平的杂交检测，检测耐盐蛋白可用抗原一抗体杂交方法进行分子水平检测．

Answer 1

分析 1、分析题图：a处为磷酸二酯键，b处为氢键，限制酶作用于磷酸二酯键，而不是氢键；
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．在把表达载体导入受体细胞时，对于动物、植物、细菌是不一样的这里要区分清楚，最后一步在鉴定时可以用DNA分子杂交法，抗原抗体杂交法，还有特性验证试验法．最简单的就是移植到盐碱地中看是否具有抗性．

解答 解：（1）获取目的基因的方法：从基因文库获取、人工合成法、PCR等技术或来源．
（2）获得的耐盐基因与质粒构建成重组分子，最终构建好的该环状分子称为表达载体（或重组DNA、重组质粒）；由于自然界中所有生物共用一套遗传密码子，因此一种生物的基因能在另一种生物体内表达．
（3）限制性核酸内切酶作用于磷酸二酯键，即图中的a处；DNA链接酶的作用是连接DNA片段形成磷酸二酯键，因此其也作用于图中的a处．
（4）质粒作为载体，具有的标记基因的作用为鉴别并筛选含有目的基因的受体细胞；启动子是RNA聚合酶识别和结合部位，能驱动转录出mRNA．将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，将转基因植物细胞培育成转基因植株，还需要采用植物组织培养技术．
（5）在进行检测时可以用放射性同位素标记的耐盐基因做探针进行分子水平的杂交检测；检测耐盐蛋白可用抗原一抗体杂交方法进行分子水平检测．
故答案为：
（1）从基因文库获取    人工合成法    PCR（只要合理即可给分）
（2）表达载体（或重组DNA、重组质粒）    共用一套密码子
（3）a     a  磷酸二酯键
（4）鉴别并筛选含有目的基因的受体细胞    RNA聚合酶识别和结合部位，驱动转录出mRNA   农杆菌转化法    植物组织培养
（5）探针  抗原一抗体杂交

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．