Question

1．回答有关基因工程的问题：
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生平末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生相同（相同、不同）的黏性末端．
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位．在用表达载体转化大肠杆菌时，常用Ca²⁺处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为分子杂交技术．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，常用抗原-抗体杂交技术．
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体DNA上．

Answer 1

分析 1、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．
2、启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．终止子是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列．
3、目的基因分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．

解答 解：（1）限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生相同的黏性末端．
（2）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质．在用表达载体转化大肠杆菌时，常用Ca²⁺处理大肠杆菌，使大肠杆菌变成感受态细胞，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用采用分子杂交技术，即用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成胰岛素，常用抗原-抗体杂交技术．
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体的DNA上．
故答案为：
（1）平    相同
（2）RNA聚合酶识别和结合的部位  Ca²⁺     分子杂交技术    蛋白质
（3）T-DNA  染色体DNA

点评 本题考查了基因工程的相关知识，要求考生能够识记限制酶的作用特点和作用结果；识记启动子的功能；识记目的基因分子水平上检测的方法；识记农杆菌转化法的相关过程等，难度适中，属于考纲中识记、理解层次的考查．