Question

8．土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应．科研人员进行如下实验：

菌株	透明圈直径（D）	菌落直径（d）	D/d
M-3-01	18.8	12.3	1.5
B3-5-6	20.7	8.0	2.6
T1-4-01	9.1	6.5	1.4

实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如图1），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小．
实验步骤：
步骤1  取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h．
步骤2  在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如表）．
分析回答：
（1）从物理形态看，培养基A属于固体培养基．培养基中磷源应该是难溶性磷酸盐．
（2）步骤1中接种方法是稀释涂布平板法，步骤2中接种环的灭菌方法是灼烧．
（3）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是B3-5-6．
（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200r•min^-1 摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到图2所示曲线．
①用摇床进行培养的好处是增加培养液中的溶氧量；使菌株与培养液充分接触，有利于物质的交换．
②结果表明最优良的解磷菌株是M-3-01．

Answer 1

分析 1、消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
3、分析表格：B3-5-6形成的透明圈最大，说明其溶解磷能力最强．

解答 解：（1）菌落只有在固体培养基上才能形成（培养过程中菌体不能运动）；要筛选溶解难溶性磷能力强的菌株，必须以难溶性磷酸盐作为唯一磷源．
（2）步骤1的目的是从土壤微生物中筛选解磷微生物，由于土壤样液中微生物种类和数量多，因此，最好采用稀释涂布平板法进行接种（如果用平板划线法，则有可能不能将全部种类的微生物进行接种，当然本题步骤1中“取稀释液1mL接种”也暗示接种方法是稀释涂布平板法）．
（3）接种环灭菌方法是灼烧，涂布器的灭菌方法是先将涂布器侵入酒精中，再将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃．
（4）根据实验原理中“透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小”，结合表格数据可以确定溶解磷能力最强的菌株是B3-5-6．
（5）摇床培养时实验室培养需氧微生物常用的方法，使用摇床培养，不仅可以增大培养液中溶氧量，促进微生物的有氧呼吸，而且能够增加菌体与培养液的接触，提高营养物质的利用率．
（6）根据实验曲线图，不难看出M-3-01实际溶解磷能力最强．
故答案为：
（1）固体   难溶性磷酸盐   
（2）稀释涂布平板法   灼烧  
（3）B3-5-6   
（4）①增加培养液中的溶氧量；使菌株与培养液充分接触，有利于物质的交换    ②M-3-01

点评 本题结合图和表格，考查微生物的培养和分离，要求考生识记接种微生物常用的两种方法及无菌技术；能根据实验原理及实验结果答题，属于考纲识记和理解层次的考查．