Question

番茄含有丰富的维生素，但不耐储存，研究者发现一种耐储存基因能使果实长期储存，想用基因工程的方法把耐储存基因转入到番茄体内．回答下列问题：
（1）用PCR技术扩增耐储存基因．PCR反应体系的配方为：磷酸缓冲液，四种脱氧核苷酸，两种引物，耐高温的DNA聚合酶，

 

．在PCR技术中，耐高温的DNA聚合酶只能特异地复制处于

 

，使这段固定长度的序列呈指数扩增．
（2）用农杆菌转化法把耐储存基因导入番茄的体细胞中．把耐储存基因插在Ti质粒的T-DNA中构建含耐储存基因的重组Ti质粒，然后把含耐储存基因的重组Ti质粒导入农杆菌中，通过

 

的作用就可以把含耐储存基因的农杆菌筛选出来，再用这样的农杆菌去感染番茄体细胞，借助T-DNA的作用就可以把耐储存基因插入到番茄体细胞的染色体DNA上．
（3）用

 

将含耐储存基因的番茄体细胞培养成番茄植株，该番茄植株体细胞含耐储存基因，用

 

的方法可以检测出耐储存基因在番茄果实细胞中是否完成表达．

Answer 1

考点：PCR技术的基本操作和应用,基因工程的原理及技术

专题：

分析：1、PCR反应体系的配方是：10倍浓缩扩增缓冲液5ml，20mmol/L的四种脱氧核苷酸的等量混合液1ml，20umol/L的两种引物各2.5uL，水28～33ml，1～5umol/L的高温的DNA聚合酶，模板DNA；
2、PCR反应过程中DNA聚合酶只能特异性的复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈知识扩增；
3、将含耐储存基因的番茄体细胞培养成番茄植株的原理是细胞的全能性，应用的技术是植物组织培养．

解答： 解：（1）PCR反应体系配方除了磷酸缓冲液，四种脱氧核苷酸，两种引物，耐高温的DNA聚合酶之外，还应该有模板DNA；在PCR技术中，耐高温的DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增．
（2）由于质粒中含有标记基因，导入重组质粒的农杆菌中具有标记基因，因此可以通过检测标记基因把含耐储存基因的农杆菌筛选出来．
（3）将导入耐储存基因的番茄体细胞培养成番茄植株所用的技术是植物组织培养；用抗原-抗体杂交的方法可以检测出耐储存基因在番茄果实细胞中是否完成表达．
故答案为：
（1）DNA模板（耐储存基因）    两个引物之间的DNA序列
（2）标记基因
（3）植物组织培养技术    抗原-抗体杂交

点评：本题的知识点是PCR技术及应用，基因工程技术及应用，植物组织培养技术及应用，旨在考查学生理解所学知识的要点，把握知识的内在联系并应用相关知识综合解决问题的能力．