Question

12．血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子，针对VEGF生产的抗肿瘤药物，是治疗癌症的一个方向；芝加哥大学的Katherine Knight博士成功地在转基因兔中获得骨髄瘤样肿瘤，经技术改进，能高产量地生产兔单克隆抗体：我国江苏省某公司首次在全球成功开发出人源化兔单抗药物“注射用人源化抗VEGF单克隆抗体”（SIM63），有效打破了跨国公司的技术垄断．人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应．请回答下列相关问题：
（1）动物细胞在体外培养的技术属于动物细胞工程，由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞淸楚，在使用合成培养基时，通常需要加入血清（或血浆）等一些天然成分：在培养时除提供细胞所需的O₂外，还需要CO2，其作用是维持培养液的PH．
（2）在基因工程中，将目的基因导入动物细胞现今极常用、极有效的方法是显微注射，要在短时间内扩增大量的目的基因采用PCR（多聚酶链式反应）技术，这个技术中的关键酶是Taq酶（热稳定DNA聚合酶）．
（3）当VEGF作为抗原进入动物体内时，动物体内的某些B细胞分化为浆细胞，这种浆细胞只分泌针对VEGF的一种抗体，但B细胞在体外培养不会无限增殖，解决这一问题的方法是通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞，常用的化学诱导融合试剂为聚乙二醇（PEG），要分离出杂交瘤细胞，应该用选择培养基进行筛选，单克隆抗体最主要的优点是它的特异性强、灵敏度高，并可大量制备．

Answer 1

分析 1、动物细胞培养条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌②添加一定量的抗生素③定期更换培养液，以清楚代谢废物
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH：
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂，CO₂主要作用是维持培养液的pH．
2、PCR技术扩增目的基因：
（1）原理：DNA双链复制
（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成．

解答 解：（1）动物细胞在体外培养的技术属于动物细胞工程，由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞淸楚，在使用合成培养基时，通常需要加入血清（或血浆）等一些天然成分，在培养时除提供细胞所需的O₂外，还需要CO2，其作用是维持培养液的PH．
（2）在基因工程中，将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射，要在短时间内扩增大量的目的基因采用PCR技术，这个技术需要利用Taq酶（热稳定DNA聚合酶）．
（3）通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞，常用的化学诱导融合试剂为聚乙二醇（PEG），要分离出杂交瘤细胞，应该用选择培养基进行筛选，单克隆抗体最主要的优点是它的特异性强、灵敏度高，并可大量制备．
故答案为：
（1）动物细胞     血清（或血浆）  维持培养液的PH
（2）显微注射   PCR（多聚酶链式反应）     Taq酶（热稳定DNA聚合酶）
（3）聚乙二醇（PEG）   选择   　特异性强、灵敏度高

点评 本题考查了基因工程、细胞工程的有关知识，要求考生能够识记PCR技术的过程和条件，识记动物细胞培养的培养条件，掌握单克隆抗体制备的过程等有关知识，属于考纲中识记、理解层次的考查．