题目内容

【题目】回答下列(一)、(二)小题;

(一)回答与香蕉酒制作有关的问题;

(1)香蕉果肉含糖高,又有一定的酸度,适于作为果酒发酵的原料。但香蕉果浆的黏度大,需向香蕉果浆中添加果胶酶使果胶最终分解为__________________,使果浆中的固体与液体分离效果更好;然后进行沸水浴处理,原因是__________________,然后对产物进行__________________,可见果汁的出汁率与澄清度大大提高。

(2)将获得的果汁置于90℃环境中__________________处理15分钟,以减少其他杂菌干扰。取出果汁后冷却,再经过糖酸调配、硫处理后,最后向果汁中添加__________________进行果酒发酵。

(3)发酵后第15天,当发酵瓶中__________________,即表示发酵完毕,可取10mL香蕉酒离心获得__________________,利用__________________法测定香蕉酒的澄清度。

(二)回答与基因工程和单克隆抗体制备有关的问题:

(1)单克隆抗体在病毒的鉴定上具有重要的作用。首先将特定抗原物多次对小鼠进行腹腔注射,取小鼠的骨髓瘤细胞和脾细胞按一定比例混合,并加入一定量的PEG或__________________作介导进行融合。

(2)将融合好的细胞接种在__________________上,并置于CO2培养箱内培养。经过一定时间后,将培养液中的杂交细胞通过__________________筛选出阳性杂交瘤细胞,为获得单一细胞群体和纯净均一的单克隆抗体,往往对阳性杂交瘤细胞进行__________________。

(3)单克隆抗体还可通过单个B细胞抗体技术获得。首先将分选到的单个B细胞进行裂解,获得特异性抗体的基因片段,利用__________________法对其进行扩增,随后构建重组质粒,并导入至细菌中大量复制,为了提高重组质粒导入细菌的效率,需要考虑__________________(至少答出两点)等因素。

(4)从细菌中提取扩增后的重组质粒,导入至小鼠成纤维细胞内表达抗体,37℃培养一段时间后,将培养液离心获取抗体,并进一步__________________、检测便可获得单克隆抗体。

【答案】半乳糖醛酸 沸水浴使纤维素等固形物凝聚 过滤 灭菌(杀菌) 酵母菌 停止出现气泡 上清液 比浊/光电比色/比色 仙台病毒 饲养层/滋养细胞 抗体检验 细胞克隆/克隆培养法 PCR 导入方法、筛选条件、防止污染、重组DNA的质量和浓度、试剂的质量(氯化钙的纯度)、受体细胞的生长状态和密度 纯化

【解析】

1、果胶酶不是特指一种酶,而是分解果胶的一类酶的总称,包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶。

2、参与果酒制作的微生物是酵母菌,其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理:

(1)在有氧条件下,1分子C6H12O6和6分子H2O和6分子O2在酶的作用下生成6分子CO2和12分子H2O,并放出大量的能量;

(2)在无氧条件下,1分子C6H12O6在酶的作用下生成2分子CO2和2分子C2H5OH,并放出少量的能量。

3、基因工程的操作步骤为:

第一步:目的基因的获取:

(1)目的基因是指:编码蛋白质的结构基因;

(2)原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成,人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法;

(3)PCR技术扩增目的基因。

第二步:基因表达载体的构建:

(1)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用;

(2)组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因。

第三步:将目的基因导入受体细胞:

(1)转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程;

(2)常用的转化方法:

①将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等;

②将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术,此方法的受体细胞多是受精卵;

③将目的基因导入微生物细胞:Ca2+转化法。

(3)重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。

第四步:目的基因的检测和表达:

(1)首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交技术;

(2)其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交;

(3)最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原--抗体杂交;

(4)有时还需进行个体生物学水平的鉴定.如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。

4、单克隆抗体制备流程:先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应,之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞;诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合,利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞;进行抗体检测,筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞;进行克隆化培养,即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养;最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

(一)(1)香蕉果肉含糖高,又有一定的酸度,适于作为果酒发酵的原料。但香蕉果浆的黏度大,需向香蕉果浆中添加果胶酶使果胶最终分解为半乳糖醛酸,使果浆中的固体与液体分离效果更好;然后进行沸水浴处理,原因是沸水浴使纤维素等固形物凝聚,然后对产物进行过滤,可见果汁的出汁率与澄清度大大提高。

(2)将获得的果汁置于90℃环境中灭菌处理15分钟,以减少其他杂菌干扰。取出果汁后冷却,再经过糖酸调配、硫处理后,最后向果汁中添加酵母菌进行果酒发酵。

(3)发酵后第15天,当发酵瓶中停止出现气泡,即表示发酵完毕,可取10mL香蕉酒离心获得上清液,利用比浊(或光电比色或比色)法测定香蕉酒的澄清度。

(二)(1)单克隆抗体在病毒的鉴定上具有重要的作用。首先将特定抗原物多次对小鼠进行腹腔注射,取小鼠的骨髓瘤细胞和脾细胞按一定比例混合,并加入一定量的PEG或灭活病毒作介导进行融合。

(2)将融合好的细胞接种在饲养层或滋养细胞上,并置于CO2培养箱内培养。经过一定时间后,将培养液中的杂交细胞通过抗体检验筛选出阳性杂交瘤细胞,为获得单一细胞群体和纯净均一的单克隆抗体,往往对阳性杂交瘤细胞进行细胞克隆(或克隆培养法)。

(3)单克隆抗体还可通过单个B细胞抗体技术获得。首先将分选到的单个B细胞进行裂解,获得特异性抗体的基因片段,利用PCR法对其进行扩增,随后构建重组质粒,并导入至细菌中大量复制,为了提高重组质粒导入细菌的效率,需要考虑导入方法、筛选条件、防止污染、重组DNA的质量和浓度、试剂的质量(氯化钙的纯度)、受体细胞的生长状态和密度等因素。

(4)从细菌中提取扩增后的重组质粒,导入至小鼠成纤维细胞内表达抗体,37℃培养一段时间后,将培养液离心获取抗体,并进一步纯化、检测便可获得单克隆抗体。

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