Question

15．某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充．
（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1g，置于经过灭菌处理的液体（填“固体”或“液体”）培养基中，28℃振荡培养．
（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行系列稀释处理．之后，将菌液涂布接种于以淀粉为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养．为避免污染，需将培养皿呈倒置状态放置．此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计未接种的空白培养基作为空白对照．在接种之前应对培养基进行高压蒸汽灭菌，灭菌温度为121℃．
（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是出现透明圈/不变蓝，则说明此菌种能够分泌淀粉酶使淀粉水解．从平板
中挑取实验效果明显的目的菌株，采用平板划线法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化．

Answer 1

分析 1、从土壤中分离目的微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．
2、培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌，富集培养可以使用液体培养基．
3、选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的．如筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌必须使用以淀粉为唯一碳源的选择培养基．

解答 解：（1）为了扩大土壤中的目的菌的数量，要在液体培养基中进行扩大培养，液体培养基要进行高压蒸汽灭菌．
（2）为避免培养液中菌体浓度过高而不能形成单菌落，需将培养液进行梯度稀释；然后菌液涂布接种于以淀粉为唯一碳源的固体培养基上进行培养，培养时为避免污染，培养皿应倒置放置．此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计未接种的空白培养基作为空白对照．在接种之前应对培养基进行高压蒸汽灭菌，灭菌温度为121℃．
（3）碘遇淀粉变蓝色，将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围象出现透明圈，则说明此种菌能够分泌淀粉酶使淀粉水解；挑取透明圈大的菌落采用平板划线法接种于新的培养基上对菌种进行进一步纯化．
故答案为：
（1）液体
（2）系列稀释（或“梯度稀释”）    　淀粉   　倒置
未接种的空白培养基（或“接种等量无菌水的培养基”）      高压蒸汽     121℃
（3）出现透明圈/不变蓝　   分泌淀粉酶使淀粉水解    　平板划线

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记无菌技术，掌握不同的灭菌方法，能在不同情况下选择合理的灭菌方法；识记实验室分离微生物的方法，能根据要求完善实验步骤，属于考纲识记和理解层次的考查．