Question

（7分）P5CS是植物合成脯氨酸的关键酶，脯氨酸有助于植物抵御干旱。下图是将P5CS基因转入烟草细胞获得耐旱烟草植株过程的示意图。

请回答:

（1）要将P5CS基因成功插入Ti质粒中，Ti质粒的 中应含有HindⅢ、SalⅠ限制酶切割位点。③过程需在农杆菌的培养基中添加 才能筛选出含P5CS基因的Ti质粒的农杆菌。

（2）检测P5CS基因是否整合到烟草细胞染色体DNA上，采用 技术，转基因是否成功可以直接在个体水平上对转基因植物与非转基因植物的 性进行比较。

（3）将转入P5CS基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用 技术，愈伤组织通过 发育成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 。

Answer 1

（1）T—DNA 四环素 （2）DNA分子杂交 抗旱/耐旱

(3)植物组织培养 再分化（细胞增殖和分化） 植物激素(生长素和细胞分裂素)

【解析】

试题分析：（1）质粒中的T—DNA又称为可转移的DNA，可以将携带的目的基因转移到受体植物细胞的染色体中去，所以该基因工程要成功，最好将目的基因重组到T—DNA中；因此Ti质粒的T—DNA中应含有HindⅢ、SalⅠ限制酶切割位点。由于重组质粒中含有完整的抗四环素基因，因此③过程需在农杆菌的培养基中添加四环素才能筛选出含P5CS基因的Ti质粒的农杆菌。

（2）检测目的基因（P5CS基因）是否整合到烟草细胞染色体DNA上，应采用DNA分子杂交技术；根据题意，P5CS是植物合成脯氨酸的关键酶，脯氨酸有助于植物抵御干旱，因此转基因是否成功可以直接在个体水平上对转基因植物与非转基因植物的抗旱性进行比较。

（3）将转入目的基因（P5CS基因）的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，愈伤组织通过再分化发育成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加生长素和细胞分裂素。

考点：本题考查基因工程和植物组织培养的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。