Question

6．在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按如图程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质和用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是固体培养基和以除草剂作为唯一氮源．制备培养基时的灭菌方法是高压蒸汽灭菌．
（3）在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是培养基中缺少这些细菌可利用的氮源或有氧条件抑制了这些细菌的生长．
（4）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是氮气，有透明带菌落利用的氮源主要是该除草剂，据此可筛选出目的菌
（5）该选育过程的接种方法是平板划线法．
（6）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
A	不生长	添加营养物质甲，能生长
B	不生长	添加营养物质乙，能生长
A+B	能生长	不添加营养物质甲、乙就能生长

突变株A不能在一般培养基上生长的原因是突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶　突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可以提供．突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供．

Answer 1

分析 1、培养基的类型
（1）按物理性质分：

名称	特征	功能
固体培养基	外观显固体状态的培养基	主要用于微生物的分离、鉴定
液体培养基	呈液体状态的培养基	主要用于工业生产

（2）按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．
（2）从物理性质方面来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基；要筛选能分解除草剂的细菌，应以该除草剂作为唯一氮源的培养基，不能降解该除草剂的细菌（除具有固氮能力的细菌外）在该培养基上是不能生长的．
（3）在以该除草剂作为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌（除具有固氮能力的细菌外）是不能生长的．
（4）含一定量该除草剂的培养基不透明，形成透明带是由于该除草剂被某些细菌降解．
（5）根据图解可知，该选育过程的接种方法是平板划线法．
（6）突变株A的生长依赖于营养物质甲，突变株B的生长依赖于营养物质乙．不添加营养物质甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是突变株A为突变株B提供了营养物质乙，突变株B为突变株A提供了营养物质甲．
故答案为：
（1）稀释
（2）固体培养基        以除草剂作为唯一氮源          高压蒸汽灭菌
（3）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源
（4）氮气     该除草剂
（5）平板划线法
（6）突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶　突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供

点评 本题考查微生物培养的实验，解答此类题目的关键是对土壤中微生物的分离与计数这个实验的熟练掌握，和在微生物实验中的无菌操作相关知识的熟练应用．