Question

6．有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解．分离能降解苯磺隆菌株的实验过程如图所示．请回答问题：

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、氮源、无机盐四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖．
（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环．与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和细胞分裂素，这些植物激素一般需要事先单独配制成母液保存备用．若是菊花的组织培养常用的培养基是MS固体培养基，原理是
植物细胞的全能性．
（3）在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．然后，将1mL土壤溶液稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为3.8×10⁷个．
（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液作图乙所示实验．该实验的假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质，该实验设计是否合理？不合理，缺少空白对照．

Answer 1

分析 微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等．筛选目的微生物必须使用选择培养基．从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法．

解答 解：（1）微生物的各种培养基配方一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养；选择培养基只允许特定种类的微生物生长，又要抑制或阻止其他种类微生物生长，因而必须以苯磺隆为唯一碳源只让目的菌株生存繁殖．
（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环．与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和细胞分裂素，这些植物激素一般需要事先单独配制成母液保存备用．若是菊花的组织培养常用MS固体培养基，原理是植物细胞的全能性．
（3）在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．然后，将1mL土壤溶液稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．根据题意，每升土壤溶液中的活菌数为：（39+38+37）÷3×100÷0.1×1000=3.8×10⁷个．
（4）从图乙上清液中加入蛋白酶溶液可知是用于水解上清液中的某蛋白质的，由此可判定实验假设是目的菌株通过分泌某种蛋白质来降解苯磺隆，但是尚需设置不加入蛋白酶的对照组实验，否则没有说服力，因而不合理．
故答案为：
（1）氮源    无机盐    只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖
（2）接种环     细胞分裂素    母液    MS固体培养基   植物细胞的全能性
（3）检测培养基平板灭菌是否合格    3.8×10⁷
（4）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质
不合理，缺少空白对照（缺少不加蛋白酶溶液，其他条件同图乙的空白对照）

点评 本题结合探究实验过程，考查微生物的培养和分离、探究实验等知识，要求考生识记培养基的成分、种类及作用；掌握分离微生物常用的两种方法及操作过程；掌握探究实验的原则，能结合图中信息知识答题．