Question

10．人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如图所示：

（1）htPA基因与载体用同种限制酶切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交技术．
（2）利用PCR技术可以获得大量的htPA基因，该技术需要耐高温的DNA聚合酶才能完成．
（3）为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．若再转htPA基因母羊的羊乳中检测到组织纤溶酶原激活物（htPA），说明目的基因成功表达．
（4）胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性．

Answer 1

分析 DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植．

解答 解：（1）目的基因和运载体需用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，产生相同的粘性末端，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交技术．
（2）利用PCR技术可以获得大量的htPA基因，该技术需要耐高温的DNA聚合酶才能完成．
（3）为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．若再转htPA基因母羊的羊乳中检测到组织纤溶酶原激活物（htPA），说明目的基因成功表达．
（4）胚胎工程是指对动物早期胚胎  或  配子所进行的多种显微操作和处理技术．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性．
故答案为：
（1）同种限制酶     DNA分子杂交
（2）PCR      耐高温的DNA聚合
（3）性别鉴定      组织纤溶酶原激活物（htPA）
（4）早期胚胎         配子     全能性

点评 本题考查了基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤；明确该基因工程中需要选择母羊进行胚胎移植；识记细胞全能性的概念等．要求考生具有扎实的基础知识，难度适中，属于考纲中识记、理解层次的考查．