题目内容
胚胎干细胞（ES细胞）在生物学研究中具有十分重要的应用价值。
（1）上图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的ES细胞中，再将改造后的ES细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。在目的基因获取和基因表达载体构建过程中使用的工具酶有 。
（2）上图中完成第Ⅱ步操作得到由两个DNA切段连接成的产物有 种重组DNA分子；第Ⅲ步操作后，还需经过 的过程，才能将该ES细胞注射到囊胚中。
（3）ES细胞在功能上具有 的特点；目前研究人员正尝试通过科技手段利用ES细胞经过特殊诱导，为因故失去手的患者提供新的“手”，该过程揭示了细胞 的机理。
（4）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，一般情况下，细胞中有D或S途径即能分裂增殖。人淋巴细胞中虽然有这两种DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠ES细胞中只有D途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加 促融，获得杂种细胞。若要从培养液中分离出杂种细胞，写出实验方法（不考虑机械方法），并说明理由。
方法：___________________________________________________________。
理由：___________________________________________________________。
（1）DNA连接酶和限制性核酸内切酶（错一处不得分）
（2）3 筛选含小鼠目的基因的胚胎干细胞
（3）发育的全能性 分化和凋亡
（4）聚乙二醇
方法：在上述试管中加入氨基嘌呤后，收集能分裂增殖的细胞（2分）
理由：淋巴细胞不能分裂，鼠ES细胞的D途径被阻断，也不能分裂，而杂种细胞中有S途径，可分裂增殖
【解析】
试题分析：（1）在目的基因获取和基因表达载体构建过程中使用的工具酶有DNA连接酶和限制性核酸内切酶。
（2）上图中第Ⅱ步操作是构建基因表达载体的过程，该过程中可由两个DNA切段连接成的产物有载体—目的基因，载体—载体，目的基因—目的基因3种重组DNA分子；第Ⅲ步操作是将目的基因导入受体细胞的过程，之后还需经过筛选含小鼠目的基因的胚胎干细胞的过程，才能将该ES细胞注射到囊胚中。
（3）ES细胞在功能上具有发育的全能性的特点；利用ES细胞经过特殊诱导，使其分化发育成“手”的过程中，要经历细胞分化和凋亡的生理过程。
（4）聚乙二醇或灭活的病毒可以促进动物细胞融合，获得杂种细胞；根据题意可知，在含氨基嘌呤的培养基中，淋巴细胞不能分裂，鼠ES细胞的D途径被阻断，也不能分裂，而杂种细胞中有S途径，可不断分裂增殖，因此可以在上述试管中加入氨基嘌呤后，收集能分裂增殖的细胞，以达到从培养液中分离出杂种细胞的目的。
考点：本题考查动物细胞工程的相关知识，意在考查考生运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力。
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