Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题：

（一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：

（1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。为了获得优良的乳酸菌菌种，分离前将泡菜汁用_________稀释后制成较稀浓度的悬液，这样做的目的是在培养时有利于获得_____。

（2）在MRS 乳酸菌专用培养基（含CaCO3）上会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。

菌种	菌落直径：C(mm)	透明圈直径：H（mm）	H/C
I	5.1	11.2	2.2
II	8.1	13.0	1.6

有关本实验的叙述，错误的是_____。

A. 应选择细菌I 进一步纯化 B.筛选乳酸菌时，菌液应稀释后划线

C.以上两种细菌均能将乳酸分泌至细胞外 D.H/C 值反映了两种细菌产生乳酸能力的差异

（3）泡菜腌制过程中会产生对人体有害的亚硝酸盐，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取滤液，加入氢氧化钠和硫酸锌溶液产生白色沉淀，经_____后过滤备用。

（4）亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与_________偶联，形成紫红色产物。然后将样品液用光程为 1cm 的比色杯，在 550nm 光波下测定光密度值。若所测得的光密度值过大应采取的措施是_____或者_____。

（二）利用基因编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中，然后通过核移植技术培育基因编辑猪， 可用于生产基因工程疫苗。下图为基因编辑猪培育流程，请回答下列问题：

（1）对 1 号猪使用促性腺激素处理，使其超数排卵，用_____定位取卵。

（2）采集 2 号猪的组织块，用胰蛋白酶处理获得分散的成纤维细胞，放置于 37℃的 CO2 培养箱中进行_________培养，其中 CO2 的作用是_____。

（3）为提高重组卵发育的成功率，实验过程中可采取的措施有： ①在核移植前对成纤维细胞进行_____培养处理； ②采用了_____技术刺激重组卵。

（4） 在 进 行 基 因 编 辑 操 作 时 ， 需 要 用 到 的 工 具 酶 有_____________。

（5）为检测病毒外壳蛋白基因是否在 4 号猪体内正常表达，可采用的方法是__________ 。

Answer 1

【答案】无菌水（或无菌蒸馏水） 单菌落 B 60℃水浴加热（或水浴加热、60℃水浴） N-1-萘基乙二胺 用蒸馏水稀释样品液 采用光程较小的比色杯 超声监视器（或B超） 液体悬浮（或悬浮、振摇、振荡） 维持培养液的pH 营养限制性培养（或调节血清浓度） 电脉冲（或电脉冲细胞融合或胚激活） 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 抗原-抗体杂交

【解析】

泡菜制作的原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸，测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐结合形成玫瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测对比，可以大致估算出亚硝酸盐的含量。

核移植过程：

（一）（1）为了获得优良的乳酸菌菌种，分离前将泡菜汁用无菌水（或无菌蒸馏水）稀释后制成较稀浓度的悬液，这样做的目的是在培养时有利于获得单菌落。

（2）A. 据图分析，菌种Ⅰ分解淀粉的能力更强，应选择细菌I 进一步纯化，A正确；

B. 图示接种方法为稀释涂布平板法，筛选分离淀粉分解菌时需要将菌液进行一定程度的稀释才能涂布培养，B错误；

C. 据图分析可知，两个菌落均产生了透明圈，说明两种细菌均能将淀粉酶分泌至细胞外，C正确；

D. 据表分析可知，H/C值越大，分解淀粉能力越强，该值的大小反映了两种细菌分解淀粉能力的差异，D正确。

故选B。

（3）为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取滤液，加入氢氧化钠和硫酸锌溶液产生白色沉淀，经60℃水浴加热后过滤备用。

（4）亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后将样品液用光程为 1cm 的比色杯，在 550nm 光波下测定光密度值。若所测得的光密度值过大时，应用蒸馏水稀释样品液或者采用光程较小的比色杯。

（二）（1）对供体母猪使用促性腺激素处理，使其超数排卵，用超声监视器定位取卵。

（2）采集2号猪的组织块，用胰蛋白酶处理获得分散的成纤维细胞，放置于 37℃的 CO2 培养箱中进行悬浮培养，其中 CO2 的作用是维持培养液的pH。

（3）为提高重组卵发育的成功率，在核移植前对成纤维细胞进行营养限制性培养处理或采用电脉冲技术刺激重组卵。

（4）在进行基因编辑操作时，需要用到的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶。

（5）为检测病毒外壳蛋白基因是否正常表达，可采用的方法是抗原-抗体杂交。