探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数。

实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多。将用表层土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖。

材料用具:农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9 mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。

方法步骤:

(1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板,应在_________________________操作。

(2)制备土壤稀释液。取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液 1 mL,转至9 mL无菌水的大试管中,依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作,试管口和移液管应在离火焰 cm处。

(3)涂布。按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布3个平板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个平板。

(4)培养。放入恒温箱内,在适宜温度条件下培养3~4d。一般每隔24h统计一次,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止

(5)细菌的计数。选取菌落数在30~300的平板进行计数。如果测试的平均值为50,则每克样品中的菌株数是 。(稀释度是105)

(6)预期结果。相同稀释度下,牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数 (填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是_____________________________________________________________(2分)。

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