Question

19．有些细菌可分解原油，从而消除有原油泄露造成的土壤污染．某同学欲从污染的土壤中采用富集培养的方法筛选出高效降解原油的细菌、经过的一般步骤是采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定，实验过程如图13所示，请分析回答：

（1）如图甲、乙是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法．

图A所示的接种方法是稀释涂布平板法，图B所示的接种方法是平板划线法．
（2）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养培养基属于选择培养基．
（3）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有1L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL 液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释10³倍．各取0.1mL已稀释10³ 倍的水样分别接种到图A的三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出样液中菌体数为5.6×10⁸．
（4）①→③重复培养的目的是增大分解原油微生物的比例．
（5）为筛选出高效菌株，可比较单菌落周围透明带区域的大小．一般透明带区域越大说明该菌株降解原油的能力越强．
（6）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行pH调整，接种前要进行高压蒸汽灭菌，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行．

Answer 1

分析 富集培养技术实际是一种选择分离微生物的技术，其所用培养基为选择培养基．本题是利用生物对特殊碳源的需求，配制特殊的培养基来进行生物的筛选，解答过程中要注意运用无菌操作的一些技术要求．

解答 解：（1）据图分析：图A中菌落均匀分布，接种方法是稀释涂布平板法，图B的接种方法是平板划线法．
（2）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养培养基属于选择培养基．
（3）每升原土壤浸出液样中菌体数为：（55+56+57）÷3÷0.1×1000×10³=5.6×10⁸ 个．  
（4）经过①②③的重复培养，增大了分解原油微生物的比例．
（5）一般情况下，透明带区域越大说明该菌株的降解对羟基苯甲酸的能力越强．
（6）培养基制作完成后，需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌．在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行．
故答案为：
（1）稀释涂布平板法   平板划线法
（2）土壤样品稀释液   原油    选择
（3）5.6×10⁸
（4）增大分解原油微生物的比例
（5）越强
（6）高压蒸汽灭菌    无菌

点评 本题主要考查目的微生物的筛选与培养，意在强化学生对目的微生物的筛选过程的理解与运用．