Question

14．如图1是利用转基因技术生产干扰素的简化流程．请分析回答：
（1）过程①使用的限制酶酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键（化学键）断开．运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过碱基互补配对原则而结合． 过程②需要用到DNA连接酶．
（2）图中A的名称是重组质粒，A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为启动子．
（3）为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取RNA与用放射性同位素标记的目的基因作的探针进行分子杂交．
（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成引物，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合（Taq酶）酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长．
（5）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是-GGATCC-．请在图2中画出质粒被切割形成黏性末端的过程图．

Answer 1

分析 分析图1：图中①过程表示利用同一种限制酶切割目的基因和质粒，以获得相同的黏性末端；②过程表示利用DNA连接酶构建基因表达载体；③过程表示将目的基因导入受体细胞．

解答 解：（1）切割目的基因和质粒需用同一种限制性核酸内切酶．限制酶破坏脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键；②是基因表达载体的构建过程，该过程还需要DNA连接酶将目的基因与质粒连接形成重组质粒．
（2）图中A为重组质粒；驱动基因转录的结构是启动子．
（3）检测目的基因是否转录，可采用分子杂交技术，即从细胞中提取RNA与用放射性同位素标记的目的基因作探针进行分子杂交．
（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成引物，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和热稳定DNA聚合酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长．
（5）黏性末端是两条链，如图：
-G′GATCC--G     GATCC-
-C CTAGG--CCTAG     G-
故答案为：
（1）限制酶   磷酸二酯键    DNA连接  
（2）重组质粒   启动子
（3）RNA    分子杂交 
（4）引物   耐高温的DNA聚合（Taq酶）
（5）-G′GATCC--G      GATCC-
-C CTAGG--CCTAG      G-

点评 本题结合利用利用转基因技术生产干扰素的简化流程，考查基因工程的技术及原理及应用，要求考生识记基因工程的原理及技术，能准确判断图中各过程的名称，能运用所学的知识结合图中信息准确判断各题．