Question

13．乳酸菌是泡菜制作中起主要作用的菌群，某科研小组从泡菜液中分离、筛选纯种乳酸菌，对其功能进行相关研究，为改进传统泡菜生产工艺提供技术参考．
（1）配制乳酸菌分离培养基：制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．该培养基的化学成分包括碳源、氮源、水、无机盐四类营养成分，在培养该细菌的培养基中还需要添加维生素（特殊营养物质）．培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法．
（2）乳酸菌菌种的分离与纯化：取泡菜发酵汁进行系列稀释操作，例如：先吸取2ml菌液，加18ml无菌水即可得到稀释10倍的菌液，再依次得到10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷倍的稀释液．选择合适的稀释度样液加入到乳酸菌分离培养基中，37℃培养2～3天，培养过程需在注意提供无氧条件，根据菌落的
形状、大小、隆起程度、颜色等特征，进行反复分离、纯化至纯菌种．某同学在10⁶倍的稀释液浓度下分别取菌液0.1ml，涂布了3个平板，菌落数分别是27，248，253，请就其中一个平板的菌落数明显偏少的原因提出一个合理的假说涂布器在酒精灯火焰上引燃后未冷却就进行涂布操作．
（3）产强酸菌株的筛选：
利用产酸菌在含CaCO₃的培养基上产生溶解圈的原理，将上述菌种接种到含CaCO₃的乳酸菌分离培养基上，经过培养，挑选溶解圈较大的菌落，进一步纯化即可得到产强酸的菌株．
（4）产强酸菌株的功能研究，结果如图：
人工接种乳酸菌有利于抑制（促进/抑制）亚硝酸盐的生成．泡菜制作过程中，影响亚硝酸盐含量的因素还有时间、温度和食盐用量等．

Answer 1

分析 分析题图：人工接种和自然发酵相比，人工接种产生的亚硝酸盐少，说明人工接种乳酸菌有利于抑制亚硝酸盐的生成．

解答 解：（1）配制乳酸菌分离培养基：制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．该培养基的化学成分包括碳源、氮源、水、无机盐四类营养成分，在培养该细菌的培养基中还需要添加维生素．培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法．
（2）乳酸菌菌种的分离与纯化：取泡菜发酵汁进行梯度稀释（或系列梯度）操作，例如：先吸取2ml菌液，加18ml无菌水即可得到稀释10倍的菌液，得到10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶倍的稀释液．乳酸菌属于厌氧菌，所以培养乳酸菌时需要厌氧环境；菌落的特征包括形状、大小、隆起程度、颜色．某同学在10⁶倍的稀释液浓度下分别取菌液0.1ml，涂布了3个平板，菌落数分别是27，248，253，其中一个平板的菌落数明显偏少的原因可能是涂布器在酒精灯火焰上引燃后未冷却就进行涂布操作．
（3）产酸菌能在含CaCO₃的培养基上产生溶解圈，且产生的溶解圈越大，说明其产酸能力越强，因此要挑选溶解圈较大的菌落进行进一步纯化．
（4）根据曲线图中结果可知，人工接种乳酸菌有利于抑制亚硝酸盐的生成．泡菜制作过程中，影响亚硝酸盐含量的因素还有时间、温度和食盐用量等．
故答案为：
（1）称量     溶化   碳源、氮源、水、无机盐       维生素
高压蒸汽灭菌法
（2）系列稀释  18   无氧   形状、大小、隆起程度、颜色          涂布器在酒精灯火焰上引燃后未冷却就进行涂布操作
（3）溶解圈较大
（4）抑制    温度    食盐用量

点评 本题结合曲线图，考查泡菜的制作、微生物的分离和培养等知识，要求考生识记参与泡菜制作的微生物及其代谢类型；识记微生物分离和培养的过程，采用的接种方法等，能结合所学的知识准确答题．