Question

20．我国一科研团队将小麦液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到水稻细胞内，获得了转基因耐盐水稻新品种．回答下列有关问题：
（1）为保证目的基因在水稻细胞中能够表达，运载体上应含有特定的B．
A．复制原点              B．启动子           C．标记基因
（2）水稻的转化过程为：将水稻幼胚接种到诱导培养基上，经过脱分化过程，培养出愈伤组织，然后用农杆菌转化法，将目的基因和相关功能片段整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上，最后诱导愈伤组织形成水稻植株．
（3）为验证外源基因整合到水稻基因组后是否转录，可从转基因植株的细胞中提取所有mRNA并反转录成cDNA（互补DNA），再以反转录产物为模板，利用TaNHX2基因特异引物，通过PCR方法进行基因扩增．若以根细胞为材料扩增结果为阳性（有产物生成），以叶细胞为材料扩增结果为阴性（无产物生成），则说明目的基因（TaNHX2基因）仅在根细胞中转录，未在叶细胞中转录．
（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入高浓度的 NaCl溶液中培养，进行耐盐试验，用非转基因幼苗作为对照．培养30天后观察现象，若转基因植株存活率高于非转基因植株（转基因植株叶片不变黄，非转基因植株叶片变黄，其它答案合理可给分）则说明转基因植株获得了耐盐特性．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）基因表达是指转录和翻译形成蛋白质，其中转录是由启动子启动的，因此为保证目的基因在水稻细胞中能够表达，运载体上应含有特定的启动子．
（2）愈伤组织是外植体经过脱分化过程形成的；将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法．
（3）mRNA反转录形成cDNA（互补DNA）；PCR技术可在体外扩增基因； 若以根细胞为材料扩增结果为阳性（有产物生成），以叶细胞为材料扩增结果为阴性（无产物生成），则说明目的基因（TaNHX2基因）仅在根细胞中转录，未在叶细胞中转录．
（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入高浓度的NaCl溶液中培养，进行耐盐试验，用非转基因幼苗作为对照，培养30天后观察现象．若转基因植株获得了耐盐特性，则转基因植株存活率高于非转基因植株（转基因植株叶片不变黄，非转基因植株叶片变黄，其它答案合理可给分）．
故答案为：
（1）B
（2）脱分化   农杆菌转化法
（3）cDNA（互补DNA）   PCR     目的基因（TaNHX2基因）仅在根细胞中转录，未在叶细胞中转录
（4）转基因植株存活率高于非转基因植株（转基因植株叶片不变黄，非转基因植株叶片变黄，其它答案合理可给分）

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．