Question

8．随着社会的发展，石油产品的使用越来越多，石油烃污染也越来越严重．为了筛选出分解石油烃能力强的微生物，人们不断地进行研究．如图为获取能分离出分解石油烃的微生物的土壤样品后的研究过程，请回答有关问题：

（1）获取土壤样品的取样地点最好选在石油烃污染明显处．为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①④所用的选择培养基只能以石油烃作为唯一碳源，其原因是只有能利用石油烃的微生物能正常生长繁殖．
（2）根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种采用的方法是涂布分离，若发现在⑤中无法区分菌落，可以将图中③取出的菌液进行（梯度）稀释．
（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环．采用灼烧方法对其进行灭菌．划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落．造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始划线（写出一点即可）．

Answer 1

分析 （1）培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐．培养基的分类：①按物理性质分，分为液体培养基和固体培养基，固体培养基中含有凝固剂，一般是琼脂．②按化学成分分，分为天然培养基和合成培养．两者的区别是天然培养基成分不确定，合成培养基成分的含量是确定的．③按用途分，分为选择培养基和鉴别培养基．选择培养基主要是培养、分离特定的微生物，培养酵母菌可在培养基中加入青霉素；鉴别培养基可以鉴定不同的微生物，比如鉴别饮用水中是否含有大肠杆菌，可以用伊红-美蓝培养基，如果菌落呈深紫色，并带有金属光泽，说明有大肠杆菌．
（2）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法．
培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法．
（3）接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法．接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体--菌落．

解答 解：（1）要获取相应的菌种，应到相应的环境中获取，获取土壤样品的取样地点最好选在石油污染明显处．有些培养基可以抑制其他微生物的生长，这样的培养基可称做选择培养基．因此，为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①一④所用培养基，其成分的特点是只含石油烃一种碳源，从而有利于目的菌的生长，抑制其他微生物的生长．
（2）④中的培养基从物理特征看属于固体培养基，可加入凝固剂琼脂处理，常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法．根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种采用的方法是涂布分离．若⑤中发现无法区分菌落，说明稀释度不够，可以将重新进行梯度稀释．
（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环．采用灼烧方法对其进行灭菌．划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落．造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始划线．
故答案为：
（1）石油烃污染明显处     只有能利用石油烃的微生物能正常生长繁殖
（2）涂布分离    进行（梯度）稀释
（3）接种环    灼烧   接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始划线

点评 本题的知识点是微生物培养过程中的无菌技术，分离微生物的常用的接种方法和接种工具，主要考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．