Question

【题目】果胶酶能分解果胶质，广泛应用于果汁和果酒的澄清，果胶酶的制备及固定化分为以下四个步骤：

（1）果胶分解菌的初筛：取霉变生菌的橘皮置于三角瓶的培养液中振荡培养获得菌悬液，配制以_______为唯一碳源的固体培养基，为避免菌悬液中菌体浓度过高，需将培养液进行_________处理，之后将处理后的菌液涂布在培养基上，适宜条件下培养72h。为了证明该培养基确实有选择作用，可设置__________作为对照组。

（2）果胶分解菌的复筛：刚果红能与果胶等多糖物质形成红色复合物，将筛选得到的菌株接种到加入刚果红的培养基中，可以从______、______的菌落中选择出菌体繁殖能力强且果胶酶活性高的菌种。

（3）果胶酶的提取与纯化：利用菌株L制备果胶酶的流程如图，其中实验、b、c代表不同的分离方法：

①a代表的方法是________；b利用不同蛋白质在不同盐浓度条件下溶解度不同能使酶从杂蛋白中析出，该方法称为________；c能除去样品中的_________

②果胶酶的活力可用_____________表示。

③粗酶液可以用凝胶色谱法分离相对分子量不同的蛋白质，装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡必须重新装。这是因为_____________。

（4）果胶酶的固定化：使用固定化酶与使用游离酶相比，优点是_____________。

Answer 1

【答案】果胶 梯度稀释 配制一组基本培养基并接种菌悬液 菌落大 透明圈与菌落相对比值大 离心 盐析 小分子杂质 单位时间单位体积中果胶的减少量或半乳糖醛酸的增加量 气泡会打乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 可重复使用，降低成本，产物易纯化

【解析】

高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。分离微生物的一般步骤是：取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株.筛选目的微生物应该使用选择培养基，接种后，应当将培养皿倒置。

（1）要筛选出果胶分解菌，要以果胶为唯一碳源的固体培养基培养，为避免菌悬液中菌体浓度过高，需将培养液进行梯度稀释处理。为了证明该培养基确实有选择作用，可设置配制一组基本培养基并接种菌悬液作为对照组。

（2）刚果红能与果胶等多糖物质形成红色复合物，将筛选得到的菌株接种到加入刚果红的培养基中，菌落大、透明圈与菌落相对比值大的菌落，菌体繁殖能力强且果胶酶活性高。

（3）①a代表通过离心从发酵液中获取上清液；b表示盐析，即利用不同蛋白质在不同盐浓度条件下溶解度不同能使酶从杂蛋白中析出；c表示通过透析除去样品中的小分子杂质。

②酶活力可以用单位时间单位体积中底物的减少量或生成物的增加量表示，即果胶酶的活力可用单位时间单位体积中果胶的减少量或半乳糖醛酸的增加量表示。

③装填凝胶色谱柱时，色谱柱内一旦有气泡存在，气泡会打乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，故必须重新装。

（4）固定化酶的优点是可重复使用，降低成本，产物易纯化。