Question

2．人外周血单核细胞能合成白介素2 （Ⅱ-2），该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解D研究人员将Ⅱ-2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有Ⅱ-2生理功能、且不易降解的Ⅱ-2-HSA融合蛋白．其技术流程如图．请回答：
（1）培养人外周血单核细胞时，需要将温度控制在37⁰C，此外还需要通入O₂和CO₂ （气体）；图中②表示逆转录过程．
（2）构建基因表达载体时能够催化磷酸二酯键断裂的工具酶是限制酶；构建好的基因表达载体必须具备启动子、目的基因、终止子、标记基因等结构，才能在宿主细胞内表达．
（3）基因表达载体1中的位点a应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2．
（4）基因表达载体2导人酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL一2对应的碱基序列不能含有终止（填“起始”或“终止”）密码子，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白．

Answer 1

分析 根据题意和图示分析可知：①表示转录提取信使RNA，②表示逆转录形成目的基因，③表示基因表达载体的构建．
限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．
胚胎移植中受体的子宫不对外来胚胎发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能．对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．

解答 解：（1）动物细胞培养所需要的条件是：95%空气和5%CO₂气体环境、适宜温度（37℃）和pH、无毒无菌的环境及合适的营养成分，其培养基中通常需加入血清、血浆等一些天然成分；图中②mRNA→cDNA，表示逆转录过程．
（2）构建基因表达载体时先用限制酶切割让质粒和目的基因的磷酸二酯键获得相同的黏性末端，然后在DNA连接酶的作用下重新组合：基因表达载体必须具备启动子、目的基因、终止子和标记基因等结构．
（3）根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，表达载体1上已有EcoRⅠ，推测位点a应含有BglⅡ．
（4）基因表达载体2导人酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL一2对应的碱基序列不能含有终止密码子，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白可用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）37    O₂和CO₂   逆转录
（2）限制酶    终止子、标记基因
（3）a
（4）终止
（5）抗原-抗体

点评 本题结合流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生能够识记动物细胞培养的条件；识记基因表达载体的组成；明确启动子和终止子的功能；识记目的基因分子水平检测的方法等．