题目内容

13．bar基因（抗除草剂基因）对除草剂PPT有抗性，来自吸水链霉菌．下列资料是抗PPT转基因棉的培育过程．
资料1：根据bar基因两端已知的碱基序列，设计合成了如下引物：
上游引物：5′-CGGAATT…C-3′
下游引物：5′-TACAAGCTT…G-3′
PCR扩增程序为：预变性后，94℃、30S；65℃、30S；72℃、1min，共35个循环．
资料2：用EcoRI/HindⅢ双酶切PCR产物和质粒pET30后，用T4-DNA连接酶连接，构建bar基因表达载体（pET30-bar），EcoRI识别切割G↑AATTC，HindⅢ识别切割A↑AGCTT．
资料3：将pET30-bar导入处于感受态的根癌农杆菌中，用含有卡那霉素的YEB固体培养基筛选出转化的根癌农杆菌，将其菌液加入棉花愈伤组织培养基中，20天后，再移入分化培养基诱导生芽、生根，形成试管苗后移栽．
情分析回答：
Ⅰ、根据资料1分析：
（1）目的基因的获取方法为PCR扩增，在PCR扩增时，除DNA模板外，还需要Taq酶和原料，Taq酶的特点是耐高温．
Ⅱ、根据资料2回答：
（2）用EcoRⅠ/HindⅢ对质粒和PCR产物进行双酶切得原因有ABCD（多选）．
A．防止质粒自身环化         B．防止bar基因自身环化
C．利于bar基因的单向连接    D．抑制切割后的分子串连形成寡素物
Ⅲ、根据材料3分析：
（3）用Ca2+（CaCI2）处理，可使根癌农杆菌进入感受态，为筛选出含bar基因的棉花愈伤组织，在愈伤组织培养基中除加入卡那霉素外，还应加入适宜浓度的除草剂PPT．在分化培养时，通过调节生长素和细胞分裂素的比例，完成对根、芽的分化诱导．

分析 1、获取目的基因的方法主要有两种：一种是从供体细胞的DNA中直接分离基因，最常用的方法是“鸟枪法”又叫“散弹射击法“；另一种是人工合成基因．
基因文库是指将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因．
基因组文库包含某种生物所有的基因；部分基因文库包含某种生物的部分基因．如：cDNA文库．
2、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
3、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）获取目的基因的方法主要有两种：一种是从供体细胞的DNA中直接分离基因，最常用的方法是“鸟枪法”又叫“散弹射击法“；另一种是人工合成基因．在PCR扩增时，除DNA模板外，还需要Taq酶和原料，Taq酶为耐高温的DNA聚合酶，其特点是耐高温．
（2）只使用EcoRI，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用DNA连接酶连接时，会导致质粒和目的基因自身环化；而利用EcoRⅠ/HindⅢ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时，不会产生自身环化．有利于bar基因的单向连接，并抑制切割后的分子串连形成寡聚物．
（3）将目的基因导入微生物细胞时，常采用感受态细胞法，即用Ca2+处理微生物细胞，使其成为感受态细胞，更容易吸收周围环境中的DNA分子．为筛选出含bar基因的棉花愈伤组织，需用选择培养基，即在愈伤组织培养基中除加入卡那霉素外，还应加入适宜浓度的除草剂PPT．不同的生长素和细胞分裂素的比例可影响根或芽的分化，故在分化培养时，通过调节生长素和细胞分裂素的比例，完成对根、芽的分化诱导．
故答案为：
（1）PCR扩增    耐高温
（2）ABCD
（3）Ca2+（CaCI2）       除草剂PPT    生长素和细胞分裂素

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因文库的种类，掌握两种基因文库的区别；识记PCR技术的条件；识记基因工程的具体操作步骤及相关细节，能结合所学的知识准确答题．

练习册系列答案
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3．对于多细胞生物而言，下列有关细胞生命历程的说法不正确的是（　　）
A．细胞分化没有导致细胞中遗传物质的改变
B．细胞衰老时细胞膜通透性改变
C．细胞癌变是所有细胞都要经历的一个阶段
D．细胞凋亡是一种细胞编程性死亡
4．有关细胞的生命历程的叙述正确的是（　　）
A．处于间期的细胞，随着时间的推移，物质运输效率逐渐降低
B．后期时，由于染色体的复制，所以染色体加倍
C．人体肌肉细胞中既含有血红蛋白基因，也含有肌动蛋白基因，两者都处于活动状态
D．细胞癌变与基因有关，细胞衰老和凋亡则与基因无关
1．高度分化的细胞仍具有发育成完整个体的潜能．下列能够为其提供实验证据的是（　　）
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C．人、鼠细胞的融合实验
D．胡萝卜细胞经组织培养产生完整植株
8．6月8日是世界海洋日．海洋是生物圈的重要组成部分，与人类的生存和发展息息相关．

（1）根据图甲分析，用标志重捕法调查大黄鱼种群密度时，若标记物易脱落，则种群密度的估计值偏高（填“偏高”“偏低”或“不变”）．
（2）海洋鱼类生活在不同的水层，这体现了生物群落的垂直结构．新建码头的桩柱表面很快被细菌附着，随后依次出现硅藻、藤壶、牡蛎等，该过程称为（群落的）演替（或初生演替）．
（3）图乙表示某海域能量流动简图，A、B、C、D表示生态系统的组成成分．图中A和B（填字母）在碳循环过程中起着关键作用．
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18．下列关于酒精在生物实验中的相关应用，叙述不正确的是（　　）
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5．如图表示处于不同生理状态的三个洋葱鳞片叶表皮细胞，请回答：

（1）A细胞处于何种生理状态质壁分离．图C中②③④结构称为原生质层，由于其伸缩性比细胞壁的大，当细胞不断失水时，二者就会逐渐分离开来．
（2）图中细胞液浓度依次是C＞A＞B．
（3）如图所示，A、B、C三个细胞处于不同浓度的溶液中，则A图与B图细胞所处的外界溶液浓度关系是A＞B
（4）假设将洋葱鳞片叶表皮细胞制成装片，并使之处于质量浓度为0.3g/mL的蔗糖溶液中而发生质壁分离，用显微镜观察一个细胞的质壁分离过程，发现该细胞形态变化的顺序将如上图所示的从B→A→C．图中标号①处的物质是质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液．
2．下列几种信息传递属于物理信息的是（　　）
A．蝴蝶更喜欢采颜色艳丽的花朵B．农民在田间通过挥手臂来驱赶鸟类
C．昆虫通过释放性引诱剂吸引异性D．蜜蜂通过跳舞向同伴传递蜜源信息
15．某海岛上生活着一种昆虫，经调查翅的长度和个体数的关系如图曲线．后来该小岛上经常刮大风，若干年后再进行调查，下列最可能代表此时情况的曲线图是（　　）
A．B．
C．D．

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