Question

17．埃博拉病毒（EBOV）是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热（EBHF）的烈性病毒，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV．请回答下列问题：
（1）方法一：给小鼠注射纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的脾脏中获取浆细胞，将获得的浆细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，再经过至少两次筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞．
（2）方法二：科学家从细胞中分离出无限增殖基因（prG），可将prG基因导入能产生抗EBOV抗体的小鼠浆细胞中，导入prG基因的浆细胞具有既能无限增殖，又能产生抗EBOV的（特异性或专一性或所需的）抗体的特点．
（3）以上两种方法获得的杂交瘤细胞或带有prG基因的浆细胞，可在无菌、无毒的环境、营养、适宜的温度和pH和一定的气体环境等条件下进行体外培养，以便源源不断的产生抗EBOV的单克隆抗体．
（4）方法二中，若用PCR扩增方法获取目的基因，则需要用到耐高温的DNA聚合（或“Taq”）酶，该方法能够成功获取目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，以便合成引物．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体．

解答 解：（1）制备单克隆抗体时，首先给小鼠注射抗原，然后从小鼠的脾脏中获取已经免疫的B细胞，然后与小鼠的骨髓瘤细胞融合，再经过至少两次筛选（第一次是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选是用抗体阳性检测法筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞）、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞．
（2）浆细胞能产生抗体，但不能无限增殖，prG基因使细胞无限增殖，因此导入prG基因的浆细胞具有的特点是既能无限增殖，又能产生抗EBOV的（特异性或专一性或所需的）抗体．
（3）动物细胞培养需要的条件为：无菌、无毒的环境、营养、适宜的温度和pH和一定的气体环境等．
（4）PCR技术是在较高温度条件下进行的，因此该过程需要用到耐高温的DNA聚合（或“Taq”）酶；该方法能够成功获取目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，以便合成引物．
故答案为：
（1）脾脏      骨髓瘤     筛选
（2）既能无限增殖，又能产生抗EBOV的（特异性或专一性或所需的）抗体
（3）无菌、无毒      温度和pH
（4）耐高温的DNA聚合（或“Taq”）        一段已知的目的基因核苷酸序列    引物

点评 本题考查基因工程、单克隆抗体的制备等知识，要求考生识记基因的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记单克隆抗体的制备过程，能结合所学的知识准确答题．