Question

1．如图为培育转基因小鼠的部分过程示意图．请回答下列问题：

（1）若需在短时间内获得较多的目的基因，通常采用PCR技术．若需在短时间内获得较多的
转基因小鼠，可以将处于桑椹胚或囊胚期的早期胚胎进行胚胎分割移植．
（2）目的基因不能直接、单独注入A细胞的原因是目的基因不能在受体细胞稳定存在（并遗传给下一代）和表达，因此需要构建含有目的基因的表达载体（或重组质粒）．
（3）图中的A细胞通常为受精卵细胞，将目的基因导入该细胞常用的方法是显微注射法．
（3）小鼠出生后可用其尾巴进行DNA检测，通过DNA分子杂交方法，检测出携带目的基因的小鼠．至于目的基因是否合成相应的蛋白质，可从转基因小鼠中提取蛋白质，并用相应的抗体进行抗原-抗体杂交，若有杂交带出现，则表明小鼠体内的目的基因已表达．
（4）在目的基因导入小鼠的A细胞时，目的基因可能随机地插入到该细胞的DNA中．这些细胞有的能发育成转基因小鼠，有的却死亡．请分析目的基因插入后导致有些A细胞死亡的最可能原因外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）体外扩增DNA（基因）应用PCR技术．来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此要在短时间内获得较多的转基因小鼠，可采用胚胎分割移植技术，一般选项发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚进行切割．
（2）由于目的基因不能在受体细胞稳定存在（并遗传给下一代）和表达，因此将目的基因导入受体细胞前需要构建基因表达载体．
（3）将目的基因导入受体细胞，如受体细胞是动物细胞常用受精卵，导入的方法是显微注射法．
（4）检测外源基因是否导入受体细胞用DNA分子杂交技术，检测目的基因是否成功表达蛋白质采用抗原-抗体杂交技术，如出现杂交带，则表明已表达．
（5）外源基因导入使小鼠死亡，可能是小鼠发育所必需的蛋白质不存在，即这些基因可能被破坏不能正常表达．
答案：
（1）PCR    桑椹胚或囊胚期    胚胎分割移植
（2）目的基因不能在受体细胞稳定存在（并遗传给下一代）和表达     表达载体（或重组质粒）
（3）受精卵    显微注射法
（4）DNA分子杂交    抗原-抗体      已表达
（5）外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．