题目内容
如图为制备固定化酵母细胞用于葡萄酒生产的流程图，请回答：
（1）本实验采用的包埋法，而制备固定化酶则不宜用此方法，原因是 ．实验过程中用CaCl2溶液处理的目的是 ．
（2）在利用葡萄酒制作葡萄醋时，除控制好温度等条件外，还要注意控制气体条件，因为醋酸菌是 （好氧/厌氧/兼性厌氧）型细菌．
（3）天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用做发酵原料的淀粉需经一系列复杂的过程转化为葡萄糖才能被利用．研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因的 ，经逆转录得到相应的cDNA，再通过 技术对目的基因大量扩增后，将其插入到质粒上以构建 ，并导入酿酒酵母菌体内，以期得到能迅速分解淀粉的酿酒酵母菌．现已在受体菌内检测到淀粉酶基因，若要进一步检测是否合成了淀粉酶，可采用 的方法进行检测．
（4）为筛选出能高效利用淀粉的转基因酿酒酵母菌，将该工程菌接种在 的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液，选择 的菌落进一步纯化培养．
（1）本实验采用的包埋法，而制备固定化酶则不宜用此方法，原因是
（2）在利用葡萄酒制作葡萄醋时，除控制好温度等条件外，还要注意控制气体条件，因为醋酸菌是
（3）天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用做发酵原料的淀粉需经一系列复杂的过程转化为葡萄糖才能被利用．研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因的
（4）为筛选出能高效利用淀粉的转基因酿酒酵母菌，将该工程菌接种在
考点：制备和应用固相化酶
专题：
分析：固定化技术包括包埋法、物理吸附法和化学结合法（交联法）；由于细胞相对于酶来说更大，难以被吸附或结合，因此多采用包埋法；酶小容易从包埋的材料漏出，一般采用化学结合法和物理吸附法．醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为30℃～35℃，醋酸菌是好氧菌，在将酒精变为醋酸时需要氧的参与，因为要适时向发酵液中充气．
若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是DNA分子杂交技术，若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用抗原-抗体杂交检测．或将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，该工程菌可产生淀粉酶分泌到培养基中，水解淀粉后的区域，遇到碘液不变蓝，会产生透明圈，这样也可以鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌．
若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是DNA分子杂交技术，若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用抗原-抗体杂交检测．或将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，该工程菌可产生淀粉酶分泌到培养基中，水解淀粉后的区域，遇到碘液不变蓝，会产生透明圈，这样也可以鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌．
解答：
解：（1）固定化酵母细胞采用包埋法，酶分子很小，容易从包埋材料中漏出，不宜用此方法；CaCl2溶液处理让Ca2+与海藻酸钠反应形成不溶于水的海藻酸钙凝胶．
（2）制备果醋的菌种是醋酸菌，属于好氧型细菌，需要持续通入无菌空气．
（3）某丝状真菌中获取淀粉酶基因的mRNA，经逆转录得到相应的cDNA，再通过PCR技术对目的基因大量扩增后，将其插入到质粒上以构建基因表达载体，并导入酿酒酵母菌体内，以期得到能迅速分解淀粉的酿酒酵母菌．在受体菌内检测到淀粉酶基因，若要进一步检测是否合成了淀粉酶，可采用抗原-抗体杂交的方法进行检测．
（5）将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，该工程菌可产生淀粉酶分泌到培养基中，水解淀粉后的区域，遇到碘液不变蓝，会产生透明圈，这样也可以鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌．
故答案为：
（1）酶分子很小，容易从包埋材料中漏出 Ca2+与海藻酸钠反应形成不溶于水的海藻酸钙凝胶
（2）好氧
（3）mRNA PCR 基因表达载体 抗原-抗体杂交
（4）以淀粉作为唯一碳源 透明圈大
（2）制备果醋的菌种是醋酸菌，属于好氧型细菌，需要持续通入无菌空气．
（3）某丝状真菌中获取淀粉酶基因的mRNA，经逆转录得到相应的cDNA，再通过PCR技术对目的基因大量扩增后，将其插入到质粒上以构建基因表达载体，并导入酿酒酵母菌体内，以期得到能迅速分解淀粉的酿酒酵母菌．在受体菌内检测到淀粉酶基因，若要进一步检测是否合成了淀粉酶，可采用抗原-抗体杂交的方法进行检测．
（5）将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，该工程菌可产生淀粉酶分泌到培养基中，水解淀粉后的区域，遇到碘液不变蓝，会产生透明圈，这样也可以鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌．
故答案为：
（1）酶分子很小，容易从包埋材料中漏出 Ca2+与海藻酸钠反应形成不溶于水的海藻酸钙凝胶
（2）好氧
（3）mRNA PCR 基因表达载体 抗原-抗体杂交
（4）以淀粉作为唯一碳源 透明圈大
点评：本题以天然酿酒酵母菌为素材，考查基因工程酵母细胞的固定化、果醋制备、基因工程等相关知识，意在考查考生的识记能力、理解能力和应用能力．
练习册系列答案
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