如图所示组织型纤维酶原激活剂(tPA)的生产过程．二氢叶酸还原酶能催化二氢叶酸还原成四氢叶酸.缺少该酶的仓鼠卵巢细胞不能合成四氢叶酸.只能在添加胸苷.甘氨酸和嘌呤的培养基中生长.转入DHFR基因的缺失型细胞可在不含胸苷.甘氨酸和嘌呤的培养基中生长．叶酸的类似物氨甲喋呤存在时.可与叶酸竞争DHFR并抑制它的活性.使细胞死亡．当DHFR� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

如图所示组织型纤维酶原激活剂（tPA）的生产过程．二氢叶酸还原酶（DHFR）能催化二氢叶酸还原成四氢叶酸，缺少该酶的仓鼠卵巢细胞不能合成四氢叶酸，只能在添加胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长，转入DHFR基因的缺失型细胞可在不含胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长．叶酸的类似物氨甲喋呤存在时，可与叶酸竞争DHFR并抑制它的活性，使细胞死亡．当DHFR基因大量扩增并表达时，氨甲喋呤不足以结合全部的DHFR，细胞能在含有氨甲喋呤的培养基中存活．请回答：
（1）图中HindⅢ和EcoRⅠ示两种限制酶的酶切位点，将组织型纤维酶原激活剂（tPA）基因插入载体时，用HindⅢ和EcoRⅠ两种限制酶同时切

，与只使用EcoRⅠ一种限制酶相比，其优点是可以防止

．同时，在酶切的反应体系中加入

酶，即可得到

．
（2）已知HindⅢ酶的识别序列是AAGCTT，酶切位点在AA之间，请写出此酶切割后的粘性末端：

（3）载体上的DHFR基因在基因工程中称为

，1号培养基中不应该加入

，2号培养基中应该加入

，1号和2号培养基在功能上属于

培养基．
（4）在2号培养基上存活的细胞还需进行

活性的检测，才能大规模培养以获得相应的产品．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：1．在切割目的基因和运载体时，一定要使用同一种限制性内切酶，这样，切出的切口才一样，才能进行碱基互补配对连接起来．两个黏性末端只要一样就可以进行碱基互补配对，再通过DNA连接酶连接起来．
2．选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基．其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率．

解答： 解：（1）在切割目的基因和运载体时，一定要使用同一种限制性内切酶，这样，切出的切口才一样，才能进行碱基互补配对连接起来．两个黏性末端只要一样就可以进行碱基互补配对，再通过DNA连接酶连接起来，形成重组质粒．只使用EcoRⅠ一种限制酶切割的话可能目的基因和运载体产生的两端末端是相同的，会引起质粒或tPA基因（载体或目的基因）自身连接．
（2）已知HindⅢ酶的识别序列是AAGCTT，酶切位点在AA之间，请写出此酶切割后的粘性末端

（3）转入DHFR基因的缺失型细胞可在不含胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长．叶酸的类似物氨甲喋呤存在时，可与叶酸竞争DHFR并抑制它的活性，使细胞死亡．当DHFR基因大量扩增并表达时，氨甲喋呤不足以结合全部的DHFR，细胞能在含有氨甲喋呤的培养基中存活．可推出载体上的DHFR基因可作为标记基因．转入DHFR基因的缺失型细胞可在不含胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长，故1号培养基中不应该加入胸苷、甘氨酸、嘌呤．当DHFR基因大量扩增并表达时，氨甲喋呤不足以结合全部的DHFR，细胞能在含有氨甲喋呤的培养基中存活，故2号培养基中应该加入氨甲喋呤．1和2号培养基都是选择性培养基．
（4）在2号培养基上存活的细胞虽能产生组织型纤维酶原激活剂，但不一定具有所需要的活性，因此还需要进行筛选检测，才能大规模培养以获得相应的产品．
故答案为：
（1）质粒和tPA基因（质粒和目的基因）    质粒或tPA基因（载体或目的基因）自身连接    DNA连接    重组载体（重组DNA）
（2）-A    AGCTT-
-TTCGA     A-
（3）标记基因    胸苷、甘氨酸、嘌呤    氨甲喋呤    选择
（4）tPA（组织性纤维酶原活性剂）

点评：本题考查了基因工程的过程和微生物培养的相关内容，意在考查考生识图获取有效信息的能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．