Question

8．一种广泛使用的除草剂（含氮 有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污 染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按图1程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL样液至盛有9mL无菌水的试管中，照此依次稀释103稀释度．各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为 55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为5.6×10⁸． 
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是
在无氮培养基中添加该除草剂．
（3）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵．在划线接种时，连续划线的目的是 将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落．
（4）在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是氮气．实验结果如图2显示的A～E五种菌株中，E是最理想菌株．

Answer 1

分析 1、选择培养基：培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长，本题这种根据流程图看，“无氮培养基+高浓度的除草剂”，说明A、B、C培养基中是以除草剂为唯一氮源．
2、每克样品中的菌落数=（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下的平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL）M代表稀释的倍数．

解答 解：（1）图中稀释的倍数是10⁸，三个菌落的平均数=（55+56+57）÷3=56，则每毫升样品中菌株数=56÷0.1×10³=5.6×10⁵个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6×10⁵×10³=5.6×10⁸个．
（2）该除草剂为含氮有机物，为了选育能降解该除草剂的细菌，应采用唯一氮源的选择培养基，即无氮的固体培养基中添加该除草剂．
（3）接种技术的核心是无菌操作，防止杂菌污染，保证培养物的纯度．在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落．
（4）由于该除草剂的培养基不透明，被菌落分解后可产生透明带，无透明带说明除草剂未被分解，菌落利用的氮源就只能是空气中的氮气了；E透明圈最大，故是最理想菌株．
故答案为：
（1）5.6×10⁸
（2）在无氮培养基中添加该除草剂 
（3）防止外来杂菌的入侵稀释获得单个菌落 
（4）氮气E

点评 本题的知识点是微生物培养，筛选微生物的方法、微生物的数目的测定等方法，主要考查学生运用微生物的培养技术解决生活中问题的能力和对微生物，是实验室培养技术的综合应用能力．