Question

13．番木瓜有较高的营养价值和医用价值，但极易感染番木瓜环斑病毒（PRV）．科研人员通过现代生物技术大量培育抗病毒番木瓜并获得其中的有效成分，请根据所学知识回答下列问题：
（1）PRV是一种RNA病毒，科研人员提取该病毒的核酸，经反转录得到PRVCP基因（目的基因），利用目的基因构建基因表达载体，其中的终止子能使转录过程在所需要的地方停下来．将目的基因导入番木瓜细胞时，常用农杆菌转化法，该方法需将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，目的基因在番木瓜细胞中表达后，使受体细胞能有效抵抗PRV的侵染．
（2）要获得抗PRV番木瓜植株，需在无菌的人工控制条件下，将受体细胞培养在人工配置的培养基上，给予适宜条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株．
（3）为了检测目的基因是否表达，需从转基因番木瓜中提取蛋白质，用相应的抗体进行检测，该方法称为抗原-抗体杂交法．
（4）上述生物技术包括转基因技术和植物细胞工程中的植物组织培养技术．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
4、目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）基因工程的操作步骤中需要利用目的基因构建基因表达载体，其中的终止子能使转录过程在所需要的地方停下来．将目的基因导入植物细胞时，常用农杆菌转化法，该方法需将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，目的基因在番木瓜细胞中表达后，使受体细胞能有效抵抗PRV的侵染．
（2）要获得抗PRV番木瓜植株，需要将番木瓜细胞培养成植株，即进行植物组织培养，该技术需在无菌的人工控制条件下，将受体细胞培养在人工配置的培养基上，给予适宜条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株．
（3）为了检测目的基因是否表达，需从转基因番木瓜中提取蛋白质，用相应的抗体进行检测，该方法称
抗原-抗体杂交法．
（4）上述生物技术包括转基因技术和植物细胞工程中的植物组织培养技术．
故答案为：
（1）基因表达载体     转录   农杆菌转化    Ti质粒
（2）无菌   愈伤组织
（3）抗原-抗体杂交      
（4）植物组织培养

点评 本题考查基因工程、植物细胞工程中的植物组织培养技术等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤；识记植物组织培养技术的过程和条件．