Question

18．图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程．请分析回答：

（1）过程①使用的（同一种）限制性核酸内切酶（限制酶）酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键（化学键）断开．运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过碱基互补原则而结合． 过程②需要用到DNA连接酶．
（2）A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为启动子．为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取mRNA与用放射性同位素标记的目的基因作探针进行分子杂交，．
（3）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成引物，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和热稳定DNA聚合酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长．
（4）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是-G′GATCC-．请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图

Answer 1

分析 分析图解：图中①过程表示利用同一种限制酶切割目的基因和质粒，以获得相同的黏性末端；②过程表示利用DNA连接酶构建基因表达载体；③过程表示将目的基因导入受体细胞．

解答 解：（1）切割目的基因和质粒需用同一种限制性核酸内切酶．限制酶破坏脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，目的基因与质粒的黏性末端之间通过碱基互补配对连接起来，通过DNA连接酶构建重组质粒．
（2）驱动基因转录的结构是启动子．检测目的基因是否转录，可从细胞中提取RNA与用放射性同位素标记的目的基因作探针进行分子杂交．
（3）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成引物，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和热稳定DNA聚合酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长．
（4）黏性末端是两条链，如图：
-G′GATCC--G     GATCC-
-C CTAGG--CCTAG     G-
 故答案为：
（1）（同一种）限制性核酸内切酶（限制酶）      磷酸二酯键   碱基互补原则   DNA连接酶
（2）启动子   mRNA   目的基因   
（3）引物   热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
（4）-G′GATCC--G         GATCC-
-C  CTAGG--CCTAG         G-

点评 本题结合利用利用转基因技术生产干扰素的简化流程，考查基因工程的技术及原理及应用，要求考生识记基因工程的原理及技术，能准确判断图中各过程的名称，能运用所学的知识结合图中信息准确判断各题．