Question

补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病，因此可以利用转基因技术人工生产F8。
某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列（图2），大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列（图1），由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物。HindⅢ、 EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，下图3中箭头所指为三种限制酶的切点。

⑴要能筛选出转基因菌种，应选用的限制性内切酶是                 ，选择的依据是             。
⑵限制酶作用于DNA的部位是         

A．氢键

B．糖苷键

C．磷酸二酯键

D．肽键

⑶控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为           。将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为                                         。

Answer 1

⑴ EcoRI（1分）  切断α片段序列，为重组DNA分子的筛选提供标记（2分）
⑵C（1分）
⑶逆（反）转录（1分）   同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的粘性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的α、ω片段序列，能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物。（2分）

解析试题分析：⑴根据题意，当大肠杆菌缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物，故可破坏质粒中的α片段序列（含两个酶切位点：HindⅢ、 EcoRI），利用X-gal底物来检测目的基因是否转入大肠杆菌，但不能选择HindⅢ，是因为HindⅢ的切割位点在F8基因内，破坏了目的基因的完整，将来就无法合成正常凝血因子F8。⑵限制酶作用于DNA分子的磷酸二酯键，使DNA分子断裂。⑶通过mRNA来合成基因的过程称为逆转录；由于用同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的α、ω片段序列，能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物。
考点：本题主要考查与基因工程相关的知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。