Question

12．不属于基因与载体结合的过程是（　　）

• A． 用一定的限制酶切割质粒暴露出黏性末端
• B． 用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端
• C． 将切下的目的基因插入到质粒的切口处
• D． 将重组的DNA导入到受体细胞中

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤（第二步），首先用一定限制酶切割质粒露出黏性末端，再用同种限制酶处理目的基因露出黏性末端，将切下的目的基因插入到质粒的切口处，最后用用DNA连接酶将目的基因和质粒连接，形成重组质粒．而将重组的DNA导入到受体细胞中进行扩增属于下一个步骤．
故选：D．

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查．