Question

7．人和哺乳动物的尿液中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．某研究小组开展土壤中分解尿素的细菌的分离和培养实验．请回答下列问题：
（1）该实验中，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，能产生脲酶的细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成红色．
（2）在接种前需要添加空白对照组以检测培养基是否被污染，该空白对照组应采取的操作要求和观察指标是将已灭菌、未接种的培养基在适宜温度下放置相应的时间，观察培养基上是否有菌落产生．若在实验中，一同学的平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此实验中出现了污染现象．该同学将30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，他的做法不正确（正确/不正确）．
（3）另一同学在五个培养基平板下均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品液0.1mL，培养一段时问后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191．该过程采取的接种方法是稀释涂布平板法，每克土壤样品中的细菌数量为1.75×10⁸个．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素．
（2）在接种前需要添加空白对照组以检测培养基是否被污染，该空白对照组应采取的操作要求和观察指标是：将已灭菌、未接种的培养基在适宜温度下放置相应的时间，观察培养基上是否有菌落产生．若在实验中，一同学的平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此实验中出现了污染现象．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，因此该同学的做法不正确．
（3）另一同学在五个培养基平板下均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品液0.1mL，培养一段时问后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191．该过程采取的接种方法是稀释涂布平板法，每克土壤样品中的细菌数量为$\frac{156+178+191}{3}{×10}^{5}×10$=1.75×10⁸个．
故答案为：
（1）尿素       酚红      红
（2）将已灭菌、未接种的培养基在适宜温度下放置相应的时间，观察培养基上是否有菌落产生       污染       不正确
（3）稀释涂布平板法       1.75×10⁸

点评 本题考查微生物相关知识，要求考生识记几种微生物常用的两种方法，掌握稀释涂布平板法计数微生物的方法，明确一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，再结合所学的知识准确答题．