Question

12．自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧的种类能产生PHB（一种可以被生物降解的塑料）．现欲获得高产PHB的自生固氮菌菌种，操作流程如下：采集土样→富集培养→分离、纯化培养→初步筛选PHB固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用．回答下列问题：
（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加含氮物质（氮源）．培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是为细菌的生长提供充足的氧气．
（2）进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入培养皿中，制成平板．此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，其中添加了一定量的琼脂．倒平板时，要待高压灭菌后的培养基冷却至50℃左右（或冷却至不烫手），再在酒精灯火焰附近操作．平板冷凝后，需置于恒温箱中1-2天后再用于接种，目的是选出没被微生物污染的平板．
（3）分离纯化培养后，得到8种形态特征有所不同的单菌落．经染色鉴定，其中3种能产生PHB．那么如何进一步筛选出高产PHB的菌种呢？请说出你的实验思路．将能产生PHB的三种菌分别接种到相同的培养基上，在相同且适宜的条件下培养相同时间，检测和比较三种菌的PHB生成量．

Answer 1

分析 1、培养基按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、纯化微生物常用的方法
①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面．
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．

解答 解：（1）自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，因此富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加含氮物质（氮源）．培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是为细菌的生长提供充足的氧气．
（2）进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入培养皿中，制成平板．此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，为固体培养基，因此培养皿中需添加了一定量的琼脂．倒平板时，要待高压灭菌后的培养基 冷却至50℃左右（或冷却至不烫手），再在酒精灯火焰附近操作．平板冷凝后，需置于恒温箱中1-2天后再用于接种，目的是选出没被微生物污染的平板．
（3）分离纯化培养后，得到8种形态特征有所不同的单菌落．经染色鉴定，其中3种能产生PHB．进一步筛选出高产PHB的菌种的实验思路为：将能产生PHB的三种菌分别接种到相同的培养基上，在相同且适宜的条件下培养相同时间，检测和比较三种菌的PHB生成量．
故答案为：
（1）含氮物质（氮源）       为细菌的生长提供充足的氧气
（2）琼脂   冷却至50℃左右（或冷却至不烫手）     酒精灯火焰     选出没被微生物污染的平板
（3）将能产生PHB的三种菌分别接种到相同的培养基上，在相同且适宜的条件下培养相同时间，检测和比较三种菌的PHB生成量

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的成分、种类及功能；识记培养基的制作过程，能结合题中信息准确答题．