(四)纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法. (2)平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作. (3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀——青夏教育精英家教网—

(四)纯化大肠杆菌

(1)微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。

(2)平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。

(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。

(4)用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。

(5)平板划线法操作步骤：

①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。

②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。

③将试管口通过火焰。

④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。

⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。

⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。

⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。

⑧将平板倒置放入培养箱中培养。

(6)涂布平板操作的步骤：

①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。

②取少量菌液，滴加到培养基表面。

③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。

④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

(三)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基

(1)方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

(2)倒平板操作的步骤：

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。

②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。

③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10-20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。

④等待平板冷却凝固，大约需5-10min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。

(二)无菌技术

(1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

(2)消毒与灭菌的区别

消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法，还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、红外线消毒。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

(一)培养基

(1)培养基可分为液体培养基和固体培养基(按照物理性质)。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。

(2)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种营养物质。满足微生物生长还需要适宜的pH、氧气的要求(根据微生物的需求提供有氧或无氧环境)、特殊营养物质等。

碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO₂、NaHCO₃等无机碳源；糖类、蛋白质、脂肪等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。

氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N₂、NH₃、NO₃^-、NH₄⁺、蛋白质、氨基酸等。只有固氮微生物才能利用N₂。

基础过关

2、考点解读

本专题主要考点有微生物的分离和培养、微生物数量的测定、选择培养基的利用、利用微生物发酵来生产人类需要的的产物以及微生物的其他方面的引用。微生物的培养、培养基对微生物的选择利用、利用微生物发酵来生产特定的产物是高考热门。近年来不少地方的试题都多有涉及。

微生物的培养和应用是选修一选修部分的重点，高考的时候也经常考到。从命题角度看主要是以微生物的应用为考察对象，进行实验设计或者其他考察，考察的内容多种多样。

1、考点盘点

内容	说明
(1)微生物的实验室培养 (2)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (3)分解纤维素的微生物的分离	贴近生活且注意和必须一酶的有关知识相联系

(三)疑难解析

1．环境问题和环境危机

环境问题可分为原生环境问题和次生环境问题。原生环境问题又称第一环境问题，是由于各种自然过程或自然灾害，如地震、火山喷发、海洋异常等造成的环境破坏。次生环境问题又又称第二环境问题，其可分两类：一是由于人类不合理的开发和利用自然环境和资源，使环境受到破坏，称为生态破坏或环境破坏，如过度放牧引起草原退化、毁林开荒造成水土流失和沙漠化等；另一是城市化和工农业高速发展而引起的环境污染。

各种环境问题是环境危机的表现形式和直接后果。环境危机或生态危机是指明由于人类盲目活动现导致局部地区甚至整个生物圈结构和功能的失衡，从而威胁到人尖的生存。环境危机包括有人口的快速增长；污染；资源的过度消耗；“土地观”的退化这四个主要方面

2．自然保护区

自然保护区是指对有代表性的自然生态系统、珍稀濒危野生动植物的天然集中分布区、有特殊意义的自然遗迹等保护对象所在的陆地、陆地水体或者海域，依法划出一定面积予以特殊保护和管理的区域。我国《自然保护区条例》规定：国家采取有利于发展自然保护区的经济、技术政策和措施，将自然保护区的发展规划纳入国民经济和社会发展计划；建设和管理自然保护区，应当妥善处理与当地经济建设和居民生产、生活的关系；国务院环境保护行政主管部门负责全国自然保护区的综合管理，国务院林业、农业、地质矿产、水利和海洋等有关行政主管部门在各自的职责范围内，主管有关的自然保护区。

截止1999年底，全国已建立各种类型的自然保护区1146个，总面积8815.2万公顷(其中陆地面积8450.9万公顷，海域面积364.3万公顷)，约占陆地国土面积的8.8%。国家级自然保护区155个，面积5751.5万公顷。

长白山、鼎湖山、卧龙、武夷山、梵净山、锡林郭勒、博格达峰、神农架、盐城、西双版纳、天目山、茂兰、九寨沟、丰林、南麂列岛等15个自然保护区被联合国教科文组织列入“国际人与生物圈保护区网”；扎龙、向海、鄂阳湖、东洞庭湖、东寨港、青海湖及香港米浦等7个自然保护区被列入《国际重要湿地名录》；九寨沟、武夷山、张家界、庐山等4个自然保护区被联合国教科文组织列为世界自然遗产或自然与文化遗产。

3．新中国成立以来我国人口发展的基本特征如下。

(1)人口增长速度快。新中国成立后，由于社会政治稳定和医疗卫生条件不断改善，加之一度对人口再生产规律认识不清，使人口出生率高速增长，人口的自然增长率除3年自然灾害时期外，一直保持在20‰以上，由此导致人口总量的猛增。1949年到1973年净增3.5亿，1974年中国人口超过9亿。自20世纪70年代政府大力提倡计划生育以来，我国人口出生率和自然增长率下降幅度很大，分别从1949年的36.00‰和16.00‰下降到1999年的15.23‰和8.77‰。但总的看来，解放后人口自然增长率是比较高的。

(2)人口增长规模大。1949年我国人口已达到5.416 7亿，新中国人口的发展就是在这个相当庞大的基数上开始的。这也就在客观上决定了我国人口增加的绝对量、增长规模必然很大。从1949年到2000年的51年间，共计增加7.536 6亿人口，致使全国人口高达12.953 3亿。因此，即使出生率和自然增长率都维持在较低的水平上，每年还要净增加1 279万人。今后30年中国人口仍将继续增加，预计到2030年中国人口达到最高峰16亿，人口数量实现零增长。

(3)人口老龄化速度快。由于我国人口的生育水平迅速下降和平均寿命延长，使中国人口年龄构成中少年儿童比例下降，成年和老年人口相对增多。1964年到2000年，0-14岁人口比例从40.7%下降到22.89%，65岁以上老年人口从3.6%上升到6.96%。因此，我国人口老龄化来势很猛。据联合国统计，1950-2000年世界老年人口增长为176%，而中国为217%。据美国有关统计显示，65岁及以上人口比例从7%上升到14%需要的时间是：法国为115年、瑞典为85年、美国为66年、英国为45年，而中国只需要25年。

(4)城镇人口比重增大。人口的城乡结构反映一个国家或地区城市化水平的高低，也与其经济发展水平密切相关。1949年我国城镇人口仅占总人口的10.6%，而且主要分布在东部沿海、沿江地区，广大的中西部地区城市人口少。随着经济的不断发展，我国城镇人口逐年增加。2000年城镇人口占总人口的36.09%，比1949年增加了25.4个百分点。但我国城市化的水平还比较低，远低于发达国家的平均水平(75%，1996年)。

4．外来物种入侵

外来物种入侵是指在一个特定地域的生态系统中，不是本地自然发生和进化的植物，而是后来通过不同的途径从其他地区传播过来的，并可以在自然状态下能够生长和繁殖的物种。可以通过以下的标准定义入侵物种：(1)通过有意或无意的人类活动而被引入一个非本源地区域；(2)在当地的自然或人为生态系统中形成了自我再生能力；(3)给当地的生态系统或地理结构造成了明显的损害或影响；(4)中国国内被引出其本源地的物种和来自其他国家的非本地物种。

外来物种已给我国生态环境、生物多样性和社会经济造成巨大危害，主要体现在：

(1)造成严重的生态破坏和生物污染。大部分外来物种成功入侵后大爆发，生长难以控制, 对生态系统造成不可逆转的破坏，造成严重的生物污染。水葫芦原产南美洲，现广泛分布于华北、华东、华中和华南大部分省市的河流、湖泊和水塘中。连绵1000公顷的滇池，水葫芦疯长成灾，布满水面，严重破坏水生生态系统的结构和功能，导致大量水生动植物的死亡。

(2)导致生物多样性的丧失。外来入侵物种通过压制或排挤本地物种，形成单优势种群，危及本地物种的生存，导致物种的消失与灭绝。原产美洲墨西哥至哥斯达黎加一带的紫茎泽兰现已广泛分布于我国西南大部分地区，在其发生区总是以满山遍野密集成片的单优植物群落出现，导致原有植物群落的衰退和消失。

(3)生态灾害频繁爆发。外来物种在适宜的生态和气候条件下，疯狂生长，生态灾害频繁爆发，对农林业造成严重的损害。近年来，松材线虫、湿地松粉蚧、松突圆蚧、美国白蛾等森林入侵害虫严重发生与危害的面积，每年约在150万公顷左右；稻水象甲、美洲斑潜蝇、马铃薯甲虫、非洲大蜗牛等入侵的害虫，每年严重发生的面积达到140~160万公顷；豚草、紫茎泽兰、飞机草、薇甘菊、空心莲子草、水葫芦、大米草等肆意蔓延，已经到了难以控制的局面。据保守估计，全国主要外来入侵物种造成的农林业经济损失平均每年达574亿元人民币。因此，必须高度重视外来入侵物种问题。

5．环境保护及其意义

环境保护是建设高度物质文明和精神文明的重要组成部分。环境保护的措施包括两个方面：一是环境污染的监测与防治；二是自然保护。防治环境污染的具体措施有：推广无污染能源；对工业“三废”进行综合治理，做到达标排放；对污水进行净化处理；对垃圾和粪便进行无害化处理；综合防治农业害虫；建立自然保护区；发展生态农业和生态工程等。要实现环境保护的目标，必须贯彻“以防为主，防治结合”的方针。

保护自然就是保护人类赖以生存的生物圈，包括自然生态系统平衡的保持和发展，生物多样性和珍稀动植物的保护，自然景观的保护等。森林是生物圈的重要成分，它具有净化空气、防风固沙、保持水土等作用，森林面积的减少是导致生态平衡破坏的重要因素之一。为大规模改善自然环境，从20世纪70年代以来，我国先后启动了三北防护林体系工程、沿海防护林体系工程等大型林业生态工程等大型林业生态工程，使生态环境明显改善。可持续发展的实质是人类与环境协调发展，要把控制人口数量，节约资源，保护环境放到重要位置，以保持人与自然的和谐与统一。

三考点例析

例　 2003年春天，SARS(“非典”)给我国和加拿大等国家、地区带来严重的危害。2003-2005年经过科学家认真研究发现，该传染病是由一种与果子狸身上极为相似的冠状病毒引起的，果子狸是SARS病毒“良好的天然宿主”。随之我国广州、深圳和香港等地，不仅禁食、禁养、禁售果子狸，而且还出现了大量捕杀、掩埋果子狸、豪猪等野生动物的现象．这些野生动物顿时遭到了灭顶之灾。你能根据生物多样性等基础知识说出这样对待果子狸的坏处吗?

[解析]本题主要是考查学生对生物多样性的价值--间接价值、潜在价值、生物间相互依赖，相互制约，生活系统稳定性原理、传染病传播原理等基础知识的理解水平和将这些知识加以综合、概括，灵活应用，合理迁移，去观察研究社会现象，分析和解决社会热点问题的能力。本题的切入点，一是根据生态系统的完整性，认识到果子狸等各种野生动物都是大自然的一部分，在当地生态系统乃至整个生物圈中都占有一定的地位，在千百万年的进化过程中，它们与自然界的无机环境和其他生物之间．经过长期“磨合”，建立了较为稳定的相互依赖，相互制约的关系，共同维持着当地生态系统乃至整个生物圈的相对稳定状态；二是充分发挥形象思维能力，想象到果子狸、豪猪等野生动物之间，野生动物与植物之间，生物与人之间的营养关系；三是从：认识到野生动物的间接使用价值和潜在价值，分析出残害果子狸野生动物留下的危机。　　

(二)知识网络