32.现有甲乙两种可能有一定毒性的化学物质,实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究,完成下列实验报告并回答有关问题。

Ⅰ.实验原理:                               。根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数(以下称Q值),可判断该化学物质的毒性。(3分)

Ⅱ.实验材料:活的小白鼠胚胎。

Ⅲ.药品用具:胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、培养瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂各时期高倍显微照片。

Ⅳ.实验步骤:

(1)制备细胞悬浮液:

把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎,转入锥形瓶中,加入胰蛋白酶液处理,使胚胎组织离散成单个细胞,再加入动物细胞培养液,制成细胞悬浮液。

(2)进行细胞培养:

①取A、B、C三个洁净的培养瓶,                     。(2分)

②向A培养瓶中加入化学物质甲,向B培养瓶中加入等量的化学物质乙,并将培养瓶摇匀。

                                   。(3分)

(3)制作临时装片:

①当细胞增殖到大约第8代左右时,同时从恒温箱中取出三个培养瓶,用胰蛋白酶液处理,使培养的细胞从瓶壁上脱落,再加入动物细胞固定液以迅速杀死细胞并固定细胞分裂相。

②静置一段时间后,分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液,滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央,                ,3~5 min后,盖上盖玻片。(2分)

(4)镜检和统计:

把临时装片放在显微镜下,先用低倍镜后用高倍镜,寻找处于     期的细胞,并与        对比以确认发生变异的细胞,同时统计该期变异的细胞占该期细胞总数的百分数(Q值)。(4分)

Ⅴ.结果与结论:

经研究人员实验得知,A、B、C三个培养瓶的Q值依次为:QA=1.3%、QB=12.5%、QC=0.1%,由此可知该实验的结论是                。(4分)

Ⅵ.回答问题:

在实验中,C培养瓶起什么作用与小白鼠正常体细胞有丝分裂各时期高倍显微照片有何不同?

                                  。(3分)

31.(9分)已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径,但能不断分裂增殖,将这两种细胞在试管中混合,加聚乙二醇促融,获得杂种细胞。

请回答:

(1)试管中除融合的杂种细胞外,还有         种融合细胞。

(2)设计一方法(不考虑机械方法),从培养液中分离出杂种细胞,并说原理。

方法:                                 

原理:                                  

                                        

             。 (2分)

(3)将分离出的杂种细胞在不同条件下继续培养,获得A、B、C三细胞株。各细胞株内含有的人染色体如右表(“+”有,“-”无),测定各细胞株中人体所具有的五种酶的活性。结果是:

①B株有a酶活性;

②A、B、C株均有b酶活性;  ③A、B株有c酶活性;

④C株有d酶活性;      ⑤A、B、C株均无e酶活性。

细胞株
人染色体编号
1
2
3
4
5
6
7
8
A株
+
+
+
+




B株
+
+


+
+


C株
+

+

+

+

若人基因的作用不受鼠基因影响,则支配a、b、c、d和e酶合成的基因依次位于人的                            号染色体上。

 0  190623  190631  190637  190641  190647  190649  190653  190659  190661  190667  190673  190677  190679  190683  190689  190691  190697  190701  190703  190707  190709  190713  190715  190717  190718  190719  190721  190722  190723  190725  190727  190731  190733  190737  190739  190743  190749  190751  190757  190761  190763  190767  190773  190779  190781  190787  190791  190793  190799  190803  190809  190817  447348 

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