Question

【题目】民间传统酒曲中含有大量的微生物，现进行下述实验分离酒曲中的主要微生物。

（实验一）将酒曲制成悬液后，分别取不同稀释度的酒曲悬液接种到GPDA培养基上，经培养后根据每个平板的菌落特征，统计不同微生物的菌落数，发现酒曲中主要有两类微生物，即酵母菌和霉菌。

（1）上述操作过程中的接种方法是______________。

（2）根据菌落特征鉴别微生物时，能够观察的菌落特征有_____________（多选）。

A．形状 B．颜色 C．表面 D．大小

在液体中，酵母菌比霉菌生长快；而酸性培养基中酵母菌比细菌生长更适宜。下述方案将酵母菌从酒曲中进行了分离。

（实验二）用小刀切开曲块，挖取米粒大小一块投入酸性蔗糖豆芽汁培养液中，然后置于25℃培养箱中培养两天。

（1）酸性蔗糖豆芽汁培养液的成分包括黄豆芽、蔗糖、乳酸和水，其中碳源物质主要是__________。

（2）上述实验操作中，需要灭菌的有_________（多选）。

A．酒曲 B．小刀 C．培养液 D．培养箱

（3）培养两天后，可见培养液变浑浊，这是因为____________________________。

（实验三）取浑浊的培养液1mL转接到另一瓶酸性蔗糖豆芽汁培养液中并培养，如此重复多次。多次转接后，取稀释液用图所示方法接种在蔗糖豆芽汁平板上。

（1）与酸性蔗糖豆芽汁培养液成分相比，蔗糖豆芽汁平板培养基中少了乳酸，多了琼脂。这种成分改变的原因是：_____________________________________________________

（2）关于图所示的接种方法的叙述，正确的是_____________（多选）。

A．酒精灯提供了局部无菌环境 B．接种环正在酒精灯火焰上灼烧灭菌

C．接种后的平板需倒置培养 D．该接种方法能得到单个菌落

Answer 1

【答案】稀释涂布平板法 ABCD 蔗糖、乳酸（或蔗糖、乳酸、黄豆芽） BC 微生物进行繁殖，数量增加 利用酵母菌在酸性液体培养基中的生长优势，通过多次转接，已筛选出酵母菌，因此不必再用酸性培养液此时通过划线要分离酵母菌，此操作需要在固体培养基上进行，因此需加琼脂 ACD

【解析】

微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等；分离和纯化微生物的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。

实验一 （1）由题干信息“分别取不同稀释度的酒曲悬液接种到GPDA培养基上”可知，上述操作过程中的接种方法是稀释涂布平板法。

（2）鉴定菌种时，作为观察的菌落特征有性状、颜色、大小、表面是否光滑等，故选ABCD。

实验二 （1）黄豆芽、蔗糖、乳酸都可以为微生物提供碳源。

（2）酒曲内含有菌种，不能灭菌，A错误；小刀、培养液都需要严格灭菌，BC正确；培养箱需要消毒，D错误；因此，本题答案选BC。

（3）培养两天后，由于微生物繁殖，数量增加，导致培养液变浑浊。

实验三（1）利用酵母菌在酸性液体培养基中的生长优势，通过多次转接，已筛选出酵母菌，因此不必再用酸性培养液；此时通过划线要分离酵母菌，此操作需要在固体培养基上进行，因此需加琼脂。

（2）接种在酒精灯附近进行，提供了局部无菌环境，A正确；图中接种环正在划线，B错误；接种后的平板需倒置培养，C正确；图示接种方法为平板划线法，最终可以得到单个菌落，D正确；因此，本题答案选ACD。