题目内容

【题目】某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端,获得了L1-GFP融合基因(简称为甲)作目的基因,并将其插入质粒P0,构建了真核表达载体P1,其部分结构和酶切位点的示意图如下,图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。回答下列问题:

(1)据图推断,该团队在将甲插入质粒P0时,使用了两种限制酶,这两种酶是_________。使用这两种酶进行酶切是为了保证_______________的完整性,启动子能与_______特异性结合驱动转录开始。

(2)将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后,若在该细胞中观察到了绿色荧光,则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了_________________过程。

(3)为了获得含有甲的牛,该团队需要做的工作包括:将能够产生绿色荧光细胞的_____________移入牛的____________中、体外培养、胚胎移植等。

(4)为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的_________(填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”)作为PCR模板。

【答案】E1和E4 RNA聚合酶 转录 翻译 细胞核 去核卵母细胞 核DNA

【解析】

目的基因的获取方法:基因文库获取,PCR,人工合成。

基因工程常用的工具:限制酶、DNA连接酶、运载体。

1)甲是L1-GFP融合基因,需要插入到质粒中启动子和终止子之间且不能破坏自身的完整性,由图可知,应该选择E1E4进行切割,启动子是RNA聚合酶结合的位点,启动转录。

2)荧光蛋白基因表达才会出现绿色荧光,故若在该细胞中观察到了绿色荧光,则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了基因表达过程,即完成了转录和翻译过程。

(3)要获得含荧光的牛,应该通过核移植技术把能够产生绿色荧光的细胞核移入去核的卵母细胞中,获得重组细胞,再经过早期胚胎培养及胚胎移植,即可获得含有甲的牛。

(4)由于基因的选择性表达,同一基因在不同细胞的表达情况不同,要检测不同细胞中是否含目的基因,不能选择RNA进行鉴定,而应该获取DNA进行检测,另外PCR的模板是DNA不是RNA

练习册系列答案
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【题目】(一)回答与制作果酒和果借有关的问题

(1)欲纯化野生酵母,最简单的分离方法是_________,若用果汁酿造果酒,可在果汁中加入果胶酶和果胶甲酯酶将果胶分解成_________,从而提高果汁的出汁率。影响果酒风味的主要因素,除了温度、pH、氧气等环境因素外,还有_________(答出2点即可)。

(2)在果醋发酵过程中,可将醋化杆菌培养物和适量的酒一一水混合物(果酒和蒸馏水按________比例混合)混匀后,调pH至______再与_______的锯末等吸附物混匀,进行发酵。

(3)下列有关果酒和果酷制作过程中,叙述正确的是________

A.若利用果酒进行果醋发酵,需将气体出口开放以排除发酵产生的CO2

B.果酒和果醋发酵过程中,充气口处均需通入无菌空气

C.在使用高产醋化醋杆菌生产果醋时,可以直接加入果汁

D.若果酒发酵结束后进行果醋发酵,需升高发温度

(二)回答与基因工程和克隆技术有关的问题:

(1)目前将目的基因导入植物细胞常用的方法是土壤农杆菌转化法,该方法的基本过程是农杆菌感染植物时,_______转移到受体细胞,并将其插人到受体细胞基因组中。若受体细胞是叶肉细胞,则再通过_______技术获得转基因植株。

(2)为解决人类治疗时出现如被人体免疫系统识别而产生人抗鼠抗体等问题,科学家们通过构建人免疫蛋白(Ig)转基因小鼠来生产单克隆抗体。构建人免疫蛋白转基因小鼠时,选择自身g基因缺陷的小鼠的受精卵作为受体细胞,导入重组载体,将经筛选好的受体细胞进行________培养,________,经代孕母鼠分娩后培育、筛选获得人免疫蛋白(g)转基因小鼠。为了获得更多这样的转基因小鼠,采用_______技术,该技术用显微操作去掉卵细胞的_______;制备单克降抗体时,用_________的方法筛选能够产生特定抗体的杂交细胞。

【题目】Ⅰ狂犬病是由狂犬病病毒引起的人畜共患的烈性传染病,制备鼠源性抗狂犬病病毒单克隆抗体是检测狂犬病病毒、治疗狂犬病的有效措施之一。请回答下列问题:

(1)用狂犬病病毒的RRIG蛋白免疫小鼠,一段时间后,若小鼠血清中检出_________的抗体,则说明小鼠产生了免疫反应。再从小鼠脾细胞中获取______,然后将其与骨髓瘤细胞融合。

(2)在细胞融合完成后,筛选出杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的特点是_____

(3)得到的单克隆抗体能准确地识别出RRIG蛋白,原因是单克隆抗体具有 ________的特性。

ⅡDNA序列D能在基因A表达的转移酶作用下,从序列D所在染色体的某个位置转移到其他位置,或随机转移到其他染色体上。科研人员利用这一原理来构建稳定遗传的大豆突变体库。

(1)科研人员分别将序列D和基因A作为____________,插入含卡那霉素抗性基因的T-DNA上,利用农杆菌转化植物,筛选得到转D植株和转A植株。

(2)将得到的转D植株或转A植株自交,若某植株所结种子中具有卡那霉素抗性的占_________,则判断该植株为T-DNA单拷贝插入。继续种植具有卡那霉素抗性的种子,长成植株后进行自交,若某植株所结种子_____________________________,可获得纯合的转D植株或转A植株。

(3)科研人员将纯合的转D植株与转A植株杂交,并根据转入两种植株中的DNA序列的差异,用PCR方法确定杂交是否成功,结果如下图所示:

据图可知,F1植株编号为________________________的杂交组是杂交成功的。

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